2種貝的胚胎和3種貝的精子超低溫冷凍保存的研究.pdf

1、目的：以二甲基亞砜為冷凍保護(hù)劑，研究馬氏珠母貝、近江牡蠣胚胎冷凍的條件，并利用已有的馬氏珠母貝精子冷凍程序，對菲律賓蛤仔、環(huán)溝格特蛤和巴非蛤的精子進(jìn)行冷凍保存。本研究的目的是嘗試建立貝類胚胎和精子超低溫冷凍保存的基本程序。 方法：1.加入抗凍保護(hù)液后，平衡時(shí)間及保護(hù)液濃度的確定：取即將冷凍的胚胎，加入DMSO，終濃度為12％、14％、16％和18％，置于0～4℃下觀察，30min后將胚胎置于室溫(25℃)左右，觀察胚胎活力恢復(fù)情

2、況，確定冷凍胚胎過程中抗凍保護(hù)液平衡時(shí)間和抗凍保護(hù)液濃度；2.馬氏珠母貝不同發(fā)育時(shí)期胚胎冷凍的研究：取不同發(fā)育時(shí)期的馬氏珠母貝胚胎，加入抗凍保護(hù)液，經(jīng)平衡后投入LN中。經(jīng)35℃水浴解凍胚胎，鏡檢觀察存活率，將存活的胚胎和幼蟲放入海水中培育，觀察存活和發(fā)育情況；3.冷凍牡蠣胚胎的研究：對牡蠣胚胎進(jìn)行冷凍，一段時(shí)間后解凍觀察牡蠣胚胎存活情況，將存活的胚胎和幼蟲放入海水中繼續(xù)培育，觀察發(fā)育存活情況；4.菲律賓蛤仔、環(huán)溝格特蛤和巴非蛤精子冷凍的

3、研究：解剖性腺發(fā)育良好的雄貝，將成熟的精子加入抗凍保護(hù)液，冷凍保存一段時(shí)間后，經(jīng)37～40℃水浴解凍，鏡檢存活情況，確定抗凍保護(hù)液的最佳濃度。 結(jié)果：1.確定了抗凍保護(hù)液平衡時(shí)間及濃度：加入抗凍保護(hù)液后平衡30min，冷凍保存，解凍觀察存活率，確定抗凍保護(hù)液最佳濃度為14％；2.冷凍馬氏珠母貝不同發(fā)育時(shí)期胚胎存活差別較大：冷凍保存馬氏珠母貝D形幼蟲，解凍后得到的存活率較高為54.2％，其他發(fā)育時(shí)期存活較少；3.牡蠣胚胎存活情況：

4、解凍牡蠣胚胎觀察，囊胚期存活率為33％，原腸期存活率為39％，擔(dān)輪幼蟲存活率為45.5％，存活率隨發(fā)育時(shí)期的不同和抗凍保護(hù)液的濃度不同而改變。4.3種貝類的精子冷凍存活率較高時(shí)抗凍保護(hù)液濃度：解凍后的精子，部分能夠正常受精，受精卵正常發(fā)育，同步性較差。當(dāng)抗凍保護(hù)液濃度為10％時(shí)，精子存活率較高。 結(jié)論：當(dāng)抗凍保護(hù)液濃度為14％時(shí)，冷凍保存馬氏珠母貝及近江牡蠣的胚胎，得到的存活率較高。不同種生物胚胎的不同發(fā)育時(shí)期存活情況不同，隨著