液相色譜梯度分析法簡(jiǎn)單介紹

1、液相色譜梯度分析法簡(jiǎn)單介紹液相色譜梯度分析法簡(jiǎn)單介紹西安瑞聯(lián)質(zhì)量部王斌強(qiáng)1.原理原理液相色譜是根據(jù)不同溶質(zhì)在流動(dòng)相和固定相之間保留的差異進(jìn)行分離和測(cè)定的方法。通常用容量因子k來(lái)表征溶質(zhì)保留值得大小，k，=(tRt0)t0，k越大則該物質(zhì)保留越強(qiáng)。容量因子k隨固定相、流動(dòng)相濃度c、溫度的不同而變化。在固定相溫度不變的情況下有以下關(guān)系式：lnk=Zlncb(Z和b為常數(shù))由此可見，隨流動(dòng)相濃度c增加，容量因子k減小。Z是每種物質(zhì)的特征參數(shù)，

2、小分子Z一般為35，大分子Z一般為10100。對(duì)于小分子的樣品，我們可以通過(guò)采用合適濃度的流動(dòng)相來(lái)使每種物質(zhì)得到分離，即平常所用的等度液相色譜分析。若對(duì)于一個(gè)既有小分子，又有大分子的樣品（如含聚合物），由于Z相差較大，在相同的流動(dòng)相濃度下，容量因子k差距就非常大，簡(jiǎn)單的講，在等度情況下，有時(shí)小分子的保留時(shí)間在45min，大分子保留時(shí)間可能在100min以上，更有甚者在有限的時(shí)間內(nèi)不出峰。梯度分析法就是為解決這個(gè)問(wèn)題產(chǎn)生的。它是采用特殊的

3、設(shè)備使流動(dòng)相的濃度隨時(shí)間變化，對(duì)保留弱的用濃度小的流動(dòng)相，對(duì)保留強(qiáng)的用濃度大的流動(dòng)相，使各組分較為均勻的流出。例如對(duì)于某樣品用60％流動(dòng)相、80％流動(dòng)相和梯度（30min內(nèi)從60％100％）的分離效果如下。60％流動(dòng)相05101520020406080100120140tmv另一種是高壓梯度，它是靠?jī)蓚€(gè)或更多的輸液泵不同流速來(lái)直接實(shí)現(xiàn)各流動(dòng)相的比例，例如需控制A:B=40:60，總流速為1mLmin時(shí)，直接設(shè)A泵流速0.4mLmin，B

4、泵流速0.6mLmin。實(shí)際上我們只需設(shè)B液的比例和總流速，儀器會(huì)自動(dòng)設(shè)置A泵流速。從以上我們可以看出低壓梯度設(shè)備便宜，但流動(dòng)相比例精度不夠，而且存在濃度梯度延遲。高壓梯度設(shè)備較貴，精度好，濃度梯度延遲很小。目前我們所用的就是高壓梯度，它由兩個(gè)泵組成，用光纖連在一起，一個(gè)主泵一個(gè)付泵，由主泵控制付泵，G.E.燈亮的是主泵。設(shè)置方法：按FUNC鍵一直到顯示SYS，主泵設(shè)為2，付泵設(shè)為1。梯度設(shè)置方法：我們只需設(shè)置一個(gè)時(shí)間段兩端時(shí)間點(diǎn)和該時(shí)