干化學(xué)技術(shù)及優(yōu)勢(shì)項(xiàng)目

1、強(qiáng)生干 化 學(xué) 技 術(shù)及 優(yōu) 勢(shì) 項(xiàng) 目,介紹內(nèi)容：,干化學(xué)技術(shù)優(yōu)勢(shì)項(xiàng)目,Vitros 950,臨床實(shí)驗(yàn)室類產(chǎn)品（生化）：,DT60, V350/250, V950,Fusion5.1,DT 60II,Vitros 350,Vitros Fusion5.1,Ortho Clinical Diagnostics,,MicroSlide － 多涂層薄膜干片技術(shù),,標(biāo)本,MicroSlide多涂層薄膜干片技術(shù)：將所

2、需試劑預(yù)固相在多層薄膜和郵票大小的透明支持基墊之上。當(dāng)血漿，血清，尿液或腦脊液與這些已含化學(xué)物質(zhì)的干式薄膜接觸時(shí)發(fā)生反應(yīng)并對(duì)反應(yīng)信號(hào)進(jìn)行測(cè)量。,,干 片 分 類,,,,CM/RT,PM,IR,,,干片(MicroSlide),,,鈉鉀氯,地高辛苯巴比妥卡馬西平苯妥因C反應(yīng)蛋白,膽固醇 甘油三酯總蛋白 白蛋白高密度酯蛋白 脂肪酶尿蛋白 腦脊液蛋白谷丙轉(zhuǎn)氨酶 谷氨酸轉(zhuǎn)移酶堿性磷酸酶

3、 r谷氨酰轉(zhuǎn)酞酶乳酸脫氫酶 肌酸激酶肌酸激酶同工酶 尿素氮肌酐 尿酸 乳酸 鐵、總鐵結(jié)合力磷 鋰,淀粉酶膽堿脂酶總膽紅素結(jié)合/非結(jié)合膽紅素血氨乙醇水楊酸茶堿醋氨酚鎂二氧化碳,比色/速率法干片,免疫速率法干片,電極法干片,,,,,,指示劑層 支持層,,,擴(kuò)散層試劑層,比色/速率法干片,通過測(cè)定干片顏色變化來確定化合物濃度,,,,,,指示劑層 支持層,,,多孔結(jié)構(gòu)

4、，允許標(biāo)本通過 均勻分布標(biāo)本 過濾大分子（蛋白質(zhì)，脂肪等） 去除干擾物質(zhì)（溶血，黃疸等） 提供反射測(cè)定的背景,擴(kuò)散層試劑層,擴(kuò)散層,比色/速率法干片結(jié)構(gòu),,試劑層,包含檢測(cè)反應(yīng)所需的酶，緩沖液，催化劑等 多層試劑，控制反應(yīng)順序,比色/速率法干片結(jié)構(gòu),葡萄糖干片,,,指示劑層,試劑層產(chǎn)物與指示劑層中的染料結(jié)合時(shí)，形成有色復(fù)合物，其與分析物濃度成正比。,比色/速率法干片結(jié)構(gòu),支持層,提供反應(yīng)支持基墊 允許光路自由通過,比色/

5、速率法干片結(jié)構(gòu),,反射光的測(cè)定,,干擾物質(zhì),反光背景,成色層,生成純凈的反射光,光源,,,,,,濾光片,接收器,,,,,,,接收器,,接收器,透 射 與 反 射,光線經(jīng)過干擾物質(zhì) 光線不經(jīng)過干擾物質(zhì) 受影響 不受影響,尿酸,優(yōu)異的抗干擾能力,MicroSlide多層涂膜技術(shù)可以針對(duì)不同檢測(cè)項(xiàng)目使用加以不同成份的薄膜以達(dá)到最佳的檢測(cè)結(jié)果某些干片中有清道夫?qū)樱ㄈ缒蛩?/p>

6、）：去除維他命C 和鈣的干擾 某些干片試劑層下有半透膜層（如尿素氮）：去除藥物干擾,,半透膜,尿素氮,－溶血－血脂－膽紅素等,能有效排除標(biāo)本中,對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成的影響,,優(yōu)異的抗干擾能力,優(yōu)勢(shì)項(xiàng)目——膽紅素,HPLC分離的膽紅素各組分,巨細(xì)胞肝炎嬰兒血清a = 游離膽紅素b = 單葡萄糖醛酸酯結(jié)合膽紅素g = 雙葡萄糖醛酸酯結(jié)合膽紅素d = 和白蛋白共價(jià)結(jié)合膽紅素,Figure 1, Ostrea EM, Ongten

7、gco EA, Tolia VA, Apostol E. J Pediatr Gastroenterol Nutr 1988; 7: 511-516.,△膽紅素,在血液循環(huán)中結(jié)合膽紅素和白蛋白形成的。白蛋白緩慢地非酶作用置換了原葡萄糖醛酸酯。類似于糖化血紅蛋白。在長(zhǎng)期的高結(jié)合膽紅素血癥后，才能檢測(cè)出來。在血液循環(huán)中的清除緩慢。半衰期和白蛋白一樣，2～3周。因?yàn)?膽紅素不存在氫鍵的影響，所以?膽紅素可以與重氮直接膽紅素反應(yīng)。,傳

8、統(tǒng)的膽紅素檢測(cè)方法,偶氮方法 (Ehrlich 1883).由 van den Bergh and Muller (1916)應(yīng)用于膽紅素檢測(cè)。直接膽紅素反應(yīng)快速。間接膽紅素反應(yīng)緩慢或不反應(yīng)（分子折疊，不溶性）。需要某些物質(zhì)的存在，才會(huì)打開游離膽紅素，使溶解在水，并和偶氮試劑反應(yīng)。,直接膽紅素,國(guó)內(nèi)長(zhǎng)期來，誤解了結(jié)合膽紅素參與反應(yīng)非?？?，整個(gè)反應(yīng)只要1分鐘，被稱為“1分鐘膽紅素”。結(jié)合膽紅素參與反應(yīng)的影響因素很多。例如：反應(yīng)時(shí)

9、使用的重氮試劑的濃度、pH、反應(yīng)時(shí)間等。結(jié)合膽紅素的重氮反應(yīng)的初期確實(shí)很快，但是，要使所有結(jié)合膽紅素完全參與反應(yīng)，需要30分鐘以上。目前推薦10分鐘的方法。目前任何一個(gè)在自動(dòng)分析儀上的直接膽紅素測(cè)定都是不完全的（如：反應(yīng)時(shí)間太短）。,少量游離膽紅素也參與直接反應(yīng),血清中的少量游離膽紅素也會(huì)參與直接反應(yīng)。因?yàn)檠逯杏心蛩?、尿酸等，早期的研究已?jīng)肯定，這些物質(zhì)的存在，具有促使游離膽紅素打開氫鍵、參與直接反應(yīng)的可能。按照膽紅素的代謝途徑，

10、在健康人的血清中，只有由白蛋白攜帶的游離膽紅素；被肝臟處理過的結(jié)合膽紅素經(jīng)膽管進(jìn)入腸道，不會(huì)進(jìn)入血液。所以健康人的血清內(nèi)不應(yīng)該有結(jié)合膽紅素。,,傳統(tǒng)膽紅素檢測(cè)方法,具有加速劑的偶氮反應(yīng) = 總膽紅素。不加加速劑的偶氮反應(yīng)= “直接反應(yīng)膽紅素” (van den Bergh) 或簡(jiǎn)稱為直接膽紅素。間接膽紅素為總膽紅素減去直接膽紅素。,Vitros 膽紅素檢測(cè)方法,現(xiàn)今已廣泛應(yīng)用 (2003年的CAP調(diào)查中在4964個(gè)實(shí)驗(yàn)室中，有119

11、1個(gè)使用該法）?？偰懠t素干片還是傳統(tǒng)的偶氮方法。 BuBc干片 (游離膽紅素Bu、結(jié)合膽紅素Bc）為非傳統(tǒng)方法。,BuBc干片,由Eastman Kodak在 1980s早期開發(fā)。使用染媒劑，不是試劑。染媒劑是什么？染媒劑可以區(qū)分結(jié)合膽紅素和游離膽紅素的最大反射差。在技術(shù)上的一個(gè)機(jī)遇。,BuBc干片技術(shù)原理,實(shí)線為Bu, 虛線為Bc.反射最大峰: Bu 460, Bc 420 nm.在 400 (二者反射強(qiáng)度相同) 和

12、 460 nm (最大反射差)閱讀。,From Wu T-W, Dappen GM, Spayd RW et al, Clinical Chemistry 1984; 30.8: 1304-9.,膽紅素的臨床應(yīng)用,黃疸的鑒別診斷,黃疸是指高膽紅素血癥引起皮膚、鞏膜和粘膜等組織黃染的現(xiàn)象。,按原因分為溶血性黃疸；細(xì)胞性黃疸；膽汁淤積性黃疸；先天性非溶血性黃疸；多因性黃疸。,按黃疸發(fā)生的部位肝前性黃疸(溶血性和非溶血性)；肝性

13、黃疸(肝細(xì)胞性和肝膽小管性即肝內(nèi)膽淤性)；肝后性(肝外梗阻性)。,成功的肝膽梗阻再通后,Kubasik et al. Am J Clin Path 1985: 84;518,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,0,50,100,1,2,3,4,5,6,7,8,9,Days,% 總膽百分比,,,,Bu,,,Bc,,,Bdelta,,,Direct,,,Treatment,膽紅

14、素組分的臨床應(yīng)用,△膽紅素（Bδ）,高結(jié)合膽紅素血癥，尤其是阻塞性黃疸時(shí)，Bc的快速下降（Bc的半衰期僅幾個(gè)小時(shí)）是阻塞完全消退的最敏感指標(biāo)。不能用檢測(cè)總膽紅素來評(píng)價(jià)高結(jié)合膽紅素血癥，因?yàn)樵跈z測(cè)的總膽紅素中包含了半衰期為2-3周的Bδ。理想的是，使用只檢測(cè)Bc的方法，臨床可較好地評(píng)價(jià)高結(jié)合膽紅素血癥。,,真實(shí)的結(jié)合膽紅素優(yōu)于直接膽紅素,膽道阻塞解除后，結(jié)合膽紅素下降迅速。直接（和總）膽紅素仍然保持高水平達(dá)數(shù)周。（D膽紅素的存

15、在）容易產(chǎn)生誤解，認(rèn)為阻塞沒有解決。,,優(yōu)勢(shì)項(xiàng)目——電解質(zhì),電極法干片,離子選擇電極技術(shù) 直接法測(cè)定兩電極間電勢(shì)不同 鉀，鈉，氯,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,鹽橋,S2,S1,S3,S4,aI,ar,,,,,,,,,,,,離子載體膜,M+ Cl,AgCl,Ag,離子載體膜,M+ Cl,AgCl,Ag,aI,ar,,,,V,,V,干片,常規(guī),已知濃度液體(參比液),待測(cè)液體(標(biāo)本),離子選擇電極(ISE),鹽橋,a

16、r,直接法 vs. 間接法 ISE,,濕化學(xué)間接法所測(cè)量的離子,,直接法所測(cè)量物質(zhì),,,直接法測(cè)量,間接法測(cè)試到的體積（93％水相）,直接法直接測(cè)量具有臨床意義的活性離子。,間接法不能糾正由蛋白質(zhì)，血脂增高引起的檢測(cè)結(jié)果偏離,間接法ISE電解質(zhì)排斥效應(yīng),標(biāo)本10微升，非水相5％，水相9.5微升稀釋100倍，加入稀釋液990微升，水相999.5微升實(shí)際稀釋倍數(shù)＝999.5／9.5＝105.211如果標(biāo)本中含K 3.50mmol/L;

17、 Na 140mmol/L間接法實(shí)測(cè)值為：3.50／105.211＊100＝3.33mmol/L 140／105.211＊100＝133.0mmol/L直接法沒有電解質(zhì)排斥效應(yīng)！,蛋白質(zhì)增高脫水巨球蛋白血癥多發(fā)性骨髓瘤高球蛋白血癥肉芽腫病某些膠原病,血脂增高甲狀腺機(jī)能減退腎病綜合癥糖原過多癥糖尿病急性胰腺炎,疾病狀態(tài)對(duì)標(biāo)本的影響,直接法 vs.