中國八省柑桔黃龍病病原菌種類和種內(nèi)分化的初步研究.pdf

1、柑桔黃龍病(Citrus huanglongbing，HLB)是由韌皮部桿菌屬(Candidatus Liberibacter)細(xì)菌引起的柑桔毀滅性病害，分布在亞洲、非洲和美洲。長期以來，HLB在中國的廣東、廣西、福建、臺灣等地區(qū)廣泛流行，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。 到目前，HLB病菌可分為三個種：亞洲種(Candidatus Liberibacter asiaticus)、非洲種(Ca.Lafricanus)以及美洲種(Ca.L am

2、ericanus)。國外相關(guān)研究還發(fā)現(xiàn)，HLB亞洲種還存在種內(nèi)分化現(xiàn)象。中國是最早發(fā)現(xiàn)有HLB發(fā)生的國家。但在中國的病原菌種類以及亞洲種種內(nèi)分化情況尚未有深入的研究。而明確我國的HLB病原菌種類以及亞洲種種內(nèi)分化情況對于我國HLB的檢測、防治以及進(jìn)一步研究意義重大。本研究通過建立和完善HLB不同種的分子檢測體系，研究廣東、廣西、福建、江西、浙江、湖南、云南及貴州等八省HLB病原菌種類；通過限制酶切指紋-單鏈構(gòu)象多態(tài)性(restricti

3、on endonuclease fingerprinting-single strandconformation polymorphism，REF-SSCP)技術(shù)以及序列分析，觀察中國HLB亞洲種種內(nèi)分化情況，并通過序列分析認(rèn)定檢測出的中國HLB美洲種。主要結(jié)論有： 1.首次建立了HLB美洲種的巢式PCR、半巢式PCR檢測體系，擴(kuò)增目的條帶分別為545bp和549bp。 2.在對來自八個有HLB發(fā)生的省的330份疑似病樣

4、中，檢測出96個樣品感染了HLB亞洲種，1個來自湖南的樣品中檢測到HLB美洲種。所有樣品中均未檢測到HLB非洲種。 3.少部分有HLB斑駁型黃化典型癥狀的樣品檢測不到已知的HLB三個種的病原菌。 4.首次將REF-SSCP技術(shù)運用于檢測HLB病原16S rDNA堿基突變情況，結(jié)果表明中國的HLB亞洲種16S rDNA非常保守，在所檢測的96個樣品中不存在明顯差異。 5.通過對8省的8個HLB亞洲種的16S rDN

5、A、16S/23S核糖體間隔區(qū)以及β操縱子上核糖體蛋白基因等進(jìn)行序列比對分析再次證明，HLB亞洲種在這些片段上同源性非常高，分別達(dá)到99.6％-100％，99.5％-100％和99.6％-100％，由此推測，中國HLB亞洲種可能缺少種內(nèi)分化情況或者種內(nèi)分化不明顯。 6.對擴(kuò)增出的中國HLB美洲種16S rDNA的549bp片段進(jìn)行克隆測序，并與GenBank公布的HLB亞洲種(L22532)、HLB非洲種(L22533)及HLB