中國柑橘潰瘍病病原菌多態(tài)性研究.pdf

1、柑橘潰瘍?。–itrus canker）是由地毯草黃單胞桿菌柑橘致病變種（Xanthomonasaxonopodis pv.citri）引起的柑橘毀滅性病害。為國內(nèi)外重大檢疫對(duì)象，主要侵染蕓香科柑橘屬、枳屬等植物，該病害主要分布在亞洲、非洲及美洲的柑橘主產(chǎn)區(qū)。
　　目前，國際上根據(jù)病原菌的地理分布和對(duì)寄主植物致病性不同，將柑橘潰瘍病菌分為A、B、C、D、E等5個(gè)菌系和柑橘、枳殼、枳柚3個(gè)致病型。柑橘潰瘍病在我國廣東、廣西、福建、江

2、西、浙江、湖南、云南、貴州等柑橘種植省（區(qū)）發(fā)生較普遍，在四川、湖北等省有局部零星分布。
　　病原菌遺傳多樣性評(píng)估是病原研究的一個(gè)重要方向，有助于了解種群遺傳結(jié)構(gòu)及病害流行學(xué)規(guī)律，同時(shí)也為病原的檢測(cè)、病害診斷及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供敏感、特異的方法。本學(xué)位論文在國家公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)(201003067-02)及教育部長(zhǎng)江學(xué)者及創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)（IRT0976）等項(xiàng)目資助下，通過對(duì)中國不同地理來源柑橘潰瘍病株系進(jìn)行遺傳分析，通過在基因上選擇

3、大量位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增，對(duì)株系間基因組的多態(tài)性進(jìn)行了初步評(píng)估。本研究主要獲得以下研究結(jié)果:
　　1、本研究從X.axonopodis pv.citri str.306株系(NC_003919.1)全基因組序列中選擇了18個(gè)串聯(lián)重復(fù)位點(diǎn)，分別設(shè)計(jì)相應(yīng)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果顯示除6對(duì)引物沒有擴(kuò)增條帶外，其余12對(duì)引物都能檢測(cè)本實(shí)驗(yàn)的樣品，其中有4對(duì)引物的擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖電泳后表現(xiàn)出明顯的多態(tài)性差異。因此，這4對(duì)引物對(duì)應(yīng)的串聯(lián)重復(fù)位點(diǎn)將用于

4、進(jìn)一步分析柑橘潰瘍病菌的多態(tài)性。
　　2、選擇上述篩選出的3個(gè)串聯(lián)重復(fù)位點(diǎn)對(duì)從貴州、湖南、廣西、浙江、江西等5省收集的162份柑橘潰瘍病樣品進(jìn)行多態(tài)性分析。結(jié)果顯示，湖南、浙江、貴州、廣西、江西的柑橘潰瘍病菌的多態(tài)性存在差異，其中貴州柑橘潰瘍病菌表現(xiàn)出的多態(tài)性最為復(fù)雜，浙江柑橘潰瘍病菌的多態(tài)性次之。從柑橘品種上看，甜橙上柑橘潰瘍病菌的多態(tài)性最為復(fù)雜，其次依次為椏柑和葡萄柚上的柑橘潰瘍病菌。
　　3、通過獲得的162個(gè)柑橘潰瘍

5、病菌樣品進(jìn)行序列分析發(fā)現(xiàn)，這些樣品在TR3位點(diǎn)的區(qū)域出現(xiàn)CGCTTCC和TTCCCCA串聯(lián)重復(fù)序列重復(fù)數(shù)(TRN)的次數(shù)為6-22次，在TR9位點(diǎn)出現(xiàn)TTTCCGA TRN的次數(shù)為9-13次，在TR10位點(diǎn)出現(xiàn)CCCGAAT TRN為的次數(shù)12-26次。運(yùn)用MEGA軟件對(duì)采自各地的162份柑橘潰瘍病菌樣品進(jìn)行進(jìn)一步的聚類分析顯示，采自相同省份的柑橘潰瘍病菌往往被歸為同一簇，且江西的樣品與其余地區(qū)樣品的差異最大，這可能與其地理分布有關(guān)。<

6、br>　　4、為從基因表達(dá)量差異的角度來篩選可能存在多態(tài)性差異的位點(diǎn)，本研究分析了柑橘潰瘍病病原菌分別在28℃下，200mM CuSO4·5H2O處理0h、1h、2h、3h、4h和5h，以及紫外光光處理0 min、15 min、30min、45min和60min后，XAC0922，XAC1380，AC1682, XAC2191, XAC3788, XAC3824, XAC1319, XAC1933, XAC3989和XAC4912等10