柑橘園黃龍病分布及老果園病原菌和伴生菌分析.pdf

1、柑橘黃龍病(Citrus Huanglongbing，HLB)是柑橘生產(chǎn)上危害最大的病害，迄今為止沒(méi)有有效的治療藥劑和抗病品種，故柑橘園黃龍病的綜合防控至關(guān)重要，了解疫區(qū)柑橘園黃龍病感染情況、感病柑橘園的感病特征是對(duì)柑橘黃龍病進(jìn)行有效防控的重要基礎(chǔ)。為明確柑橘黃龍病菌（Ca.L.asiaticus,CLas）在柑橘園中的分布情況，以及老果園感染黃龍病多年仍保持穩(wěn)定生產(chǎn)的原因，進(jìn)一步為柑橘黃龍病的綜合防控提供有價(jià)值的參考數(shù)據(jù)，本研究以來(lái)自

2、江西贛州安遠(yuǎn)縣新建果園、福建永春天馬柑橘場(chǎng)新建果園與猛虎柑橘場(chǎng)老果園的樣品為研究材料，采用Nested PCR法對(duì)柑橘植株進(jìn)行黃龍病菌檢測(cè)并分析不同果園的HLB感病特征，獲得以下主要結(jié)果:
　　1.感病果園黃龍病菌分布情況調(diào)查:利用Nested PCR法對(duì)江西贛州安遠(yuǎn)縣同一地點(diǎn)、相同管理模式的6個(gè)果園的柑橘植株進(jìn)行柑橘黃龍病病原菌的檢測(cè)調(diào)查，結(jié)果表明:病原菌在果園中均有分布，不同果園感病程度不同，6個(gè)果園感病植株率介于27％-64

3、.5％之間;感病植株病原菌含量普遍較低，70％以上的感病植株感病等級(jí)為1（8個(gè)樣品中僅1到2個(gè)樣品為黃龍病陽(yáng)性）;同一果園中，病原菌在果園不同位置（邊緣、中心）、植株不同方向（東、南、西、北）的分布比例明顯不同，差異較大。
　　2.黃龍病疫區(qū)蘆柑種植新模式對(duì)黃龍病防控效果的調(diào)查:將福建永春種植新模式果園——天馬柑橘場(chǎng)與江西贛州新建果園、福建永春老果園的HLB病情調(diào)查結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果表明:2016年4/5月的調(diào)查結(jié)果中，天馬柑橘場(chǎng)

4、的感病植株率為8.33％，明顯低于另外兩處果園的40％、71％;將感病植株進(jìn)行清除后，2017年4月對(duì)天馬柑橘場(chǎng)進(jìn)行第二次HLB調(diào)查，結(jié)果顯示感病植株率為零。說(shuō)明新模式下，果園HLB病情受到了良好的控制。
　　3.對(duì)福建永春老果園感病多年但一直保持生產(chǎn)的原因進(jìn)行調(diào)查研究:HLB調(diào)查結(jié)果顯示，三次調(diào)查中HLB株感病率皆在70％以上。對(duì)病、健植株的韌皮部樣品進(jìn)行16S擴(kuò)增子高通量測(cè)序，結(jié)果顯示:感病植株中CLas相對(duì)豐度達(dá)66％，OT

5、Us(Operational Taxonomic Units)聚類結(jié)果顯示感病植株中有62個(gè)特有OTUs，含有多種抗不同逆境的細(xì)菌;健康植株中有60個(gè)特有OTUs，含有多種具有生物降解功能或抗藥性的細(xì)菌。進(jìn)一步采用T-A克隆法對(duì)高通量測(cè)序結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，獲得的24條基因序列中有13條與高通量測(cè)序獲得的序列一致性達(dá)到95％以上，說(shuō)明16S擴(kuò)增子高通量測(cè)序結(jié)果與驗(yàn)證結(jié)果是吻合的。
　　4.江西贛州、福建永春猛虎柑橘場(chǎng)黃龍病菌噬菌體差異分

6、析:對(duì)兩地柑橘黃龍病菌原噬菌體種類進(jìn)行鑒定分析，原噬菌體SC1選取特異基因Hol，原噬菌體SC2選取特異基因Taa，通過(guò)T-A克隆法獲得的上述基因序列，進(jìn)行進(jìn)一步比較分析表明:江西贛州、福建永春兩地來(lái)源的柑橘黃龍病菌分離物中，Hol基因、Taa基因堿基序列無(wú)明顯差異，且與已報(bào)道的CLas株系中相對(duì)應(yīng)基因同源性達(dá)100％(基因登錄號(hào):CP004005.1，CP019958.1，CP010804.1，KX879602.1)。證實(shí)福建、永春柑