大豆抗原蛋白對斷奶仔豬血清中細(xì)胞因子的影響及腸道致敏作用.pdf

1、本試驗(yàn)將不同劑量純化β-伴大豆球蛋白（7S）和大豆球蛋白（11S）添加到斷奶仔豬日糧中，建立不同程度致敏仔豬模型，采用ELISA、石蠟切片、免疫組織化學(xué)以及實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，研究大豆抗原蛋白對斷奶仔豬血清中細(xì)胞因子、腸道黏膜形態(tài)、緊密連接Claudin-1蛋白及其基因相對表達(dá)量的影響，探討β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白對斷奶仔豬的致敏作用。
　　選取70頭24日齡“杜×長×大”三元雜交斷奶仔豬，采用隨機(jī)分組設(shè)計(jì)，分成7個(gè)組，每

2、組10頭仔豬。所有仔豬于24日齡斷奶并稱量體重，開始飼喂試驗(yàn)日糧。A組為對照組，飼喂基礎(chǔ)日糧；B、C、D組仔豬分別飼喂基礎(chǔ)日糧+500μg/kg·Wβ-伴大豆球蛋白、基礎(chǔ)日糧+2000μg/kg·Wβ-伴大豆球蛋白和基礎(chǔ)日糧+5000μg/kg·Wβ-伴大豆球蛋白；E、F、G組仔豬分別飼喂基礎(chǔ)日糧+500μg/kg·W大豆球蛋白、基礎(chǔ)日糧+2000μg/kg·W大豆球蛋白和基礎(chǔ)日糧+5000μg/kg·W大豆球蛋白。在26、28、30日

3、齡經(jīng)前腔靜脈采血，用于測定血清中細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-8和IFN-γ含量。在31日齡時(shí)，各試驗(yàn)組分別選取5頭仔豬前肢動脈放血致死，剪取十二指腸、空腸和回腸組織，分成2份，其中1份迅速放入4％多聚甲醛保存，用于石蠟切片制作及小腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白Claudin-1免疫組織化學(xué)檢測；另1份迅速放入液氮中保存，用于小腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白Claudin-1 mRNA表達(dá)量的qPCR檢測。
　　結(jié)果表明：
　

4、　1、添加2000μg/kg·W、5000μg/kg·W劑量7S和添加5000μg/kg·W劑量11S可顯著提高仔豬血清中IL-2、IL-4、IL-6的含量（P＜0.05或P＜0.01），顯著降低仔豬血清中IFN-γ的含量（P＜0.05或P＜0.01）；添加5000μg/kg·W劑量的7S和11S可顯著升高仔豬血清中IL-8的含量（P＜0.05)；添加500μg/kg·W劑量的7S和11S對仔豬血清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-

5、8和IFN-γ的影響不顯著。
　　2、β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白能夠改變小腸腸道黏膜結(jié)構(gòu)，使小腸絨毛高度降低、隱窩深度增加。添加2000μg/kg·W、5000μg/kg·W劑量的7S和11S能夠顯著降低仔豬十二指腸和空腸的絨毛高度，添加5000μg/kg·W劑量的7S和11S能夠顯著降低仔豬回腸的絨毛高度，添加2000μg/kg·W、5000μg/kg·W劑量的7S和5000μg/kg·W劑量的11S能夠顯著增加十二指腸、空腸

6、和回腸的隱窩深度。
　　3、β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白可以使十二指腸、空腸和回腸緊密連接蛋白Claudin-1表達(dá)量降低，其中添加2000μg/kg·W、5000μg/kg·W劑量的7S和添加5000μg/kg·W劑量的11S能夠顯著降低斷奶仔豬十二指腸和空腸緊密連接蛋白Claudin-1表達(dá)量（P＜0.05或P＜0.01），添加5000μg/kg·W劑量的7S和11S能夠顯著降低斷奶仔豬回腸緊密連接蛋白Claudin-1表達(dá)量

7、（P＜0.01）。
　　4、β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白能夠不同程度地降低仔豬腸道緊密連接蛋白Claudin-1 mRNA相對表達(dá)量。添加2000μg/kg·W、5000μg/kg·W劑量的7S和11S能夠顯著降低仔豬十二指腸緊密連接蛋白Claudin-1 mRNA相對表達(dá)量（P＜0.05或P＜0.01），添加500μg/kg·W、2000μg/kg·W、5000μg/kg·W劑量的7S和11S能夠顯著降低仔豬空腸前段緊密連接蛋白

8、Claudin-1 mRNA相對表達(dá)量（P＜0.05或P＜0.01），添加5000μg/kg·W劑量的7S和11S能夠顯著降低空腸中段、空腸后段和回腸緊密連接蛋白Claudin-1 mRNA相對表達(dá)量。
　　綜上所述，β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白能夠明顯提高仔豬血清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-8含量，降低INF-γ含量；飼喂大豆抗原蛋白后的仔豬小腸各段絨毛高度降低、隱窩深度增加，腸黏膜緊密連接蛋白Claudin-1及其m