大豆抗原蛋白免疫劑對(duì)仔豬的免疫效果的研究.pdf

1、本試驗(yàn)首先對(duì)大豆抗原蛋白進(jìn)行純化，獲得高純度的7S和11S，再制備7S和11S免疫劑，通過(guò)口服或注射兩種途徑免疫仔豬，研究大豆抗原蛋白免疫劑對(duì)仔豬的免疫效果。選取70頭7日齡的仔豬隨機(jī)分成7組，每組10頭，分為對(duì)照組、7S致敏組、11S致敏組、7S口服免疫＋致敏組、11S口服免疫＋致敏組、7S注射免疫＋致敏組和11S注射免疫＋致敏組。在仔豬7日齡和14日齡時(shí)，分別進(jìn)行初次免疫和再次免疫，對(duì)照組注射生理鹽水，各免疫致敏組按1 mg·kg-

2、1體重的劑量進(jìn)行口服或注射；27日齡時(shí)，對(duì)仔豬進(jìn)行皮膚致敏試驗(yàn)；在7、14、21、27日齡時(shí)，所有仔豬經(jīng)頸靜脈采血，而后分離血清，采用瓊脂擴(kuò)散法測(cè)定7S和11S的抗體效價(jià)，ELISA法檢測(cè)血清IgA、IgM、IgE、IgG和IL-4水平。仔豬于21日齡斷奶。除對(duì)照組外，其余各組仔豬從21日齡開(kāi)始進(jìn)行人工致敏，每組在基礎(chǔ)日糧中分別添加5％的7S和11S。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每組隨機(jī)選取5頭仔豬進(jìn)行宰殺，取十二指腸、空腸的近端、中端以及末端和回腸組

3、織，分成兩份，一份放入多聚甲醛中保存，用免疫組化方法測(cè)定sIgA表達(dá)水平；另一份放入液氮中，用熒光定量PCR法測(cè)定腸組織IgA mRNA的相對(duì)表達(dá)量以及ELISA法測(cè)定腸道組胺含量。
　　結(jié)果顯示：
　　1.通過(guò)純化，本試驗(yàn)獲得了高純度的11S和7S蛋白，純度分別為93.1%和92.3%。
　　2.對(duì)照組和注射免疫＋致敏組仔豬皮膚致敏反應(yīng)不明顯，而口服免疫＋致敏組仔豬皮膚致敏評(píng)判結(jié)果達(dá)到―+級(jí)，致敏組的仔豬其紅斑直徑達(dá)

4、到了―＋＋級(jí)以上，且7S致敏性高于11S。
　　3.在21日齡時(shí)，注射免疫＋致敏組的仔豬血清中抗體效價(jià)達(dá)1：32，口服免疫＋致敏組仔豬血清中抗體效價(jià)為1：16。27日齡時(shí)，致敏組的仔豬血清中抗體效價(jià)水平高達(dá)1：64，而免疫+致敏組仔豬抗體效價(jià)為1：32。
　　4.在21日齡時(shí)，免疫＋致敏組仔豬血清IgG、IgE和IL-4水平顯著高于對(duì)照組（P<0.01）。在27日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，免疫＋致敏組和致敏組仔豬血清中IgG、Ig

5、E和IL-4水平顯著或極顯著升高（P<0.05或P<0.01）；致敏組顯著高于免疫＋致敏組（P<0.05），7S致敏組和7S免疫＋致敏組分別高于11S致敏組和11S免疫＋致敏組（P<0.05），口服免疫＋致敏組高于注射免疫＋致敏組（P<0.05）。在27日齡時(shí)，致敏組和口服免疫＋致敏組仔豬血清IgA水平以及致敏組和免疫＋致敏組仔豬血清IgM水平顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。
　　5.在27日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，各致敏組仔豬十二指

6、腸組胺含量極顯著降低（P<0.01）。7S、11S注射免疫＋致敏組組胺含量極顯著高于7S、11S口服免疫＋致敏組（P<0.01）。7S致敏組空腸組胺含量極顯著低于其他各免疫＋致敏組（P<0.01），7S注射免疫＋致敏組高于7S口服免疫＋致敏組（P<0.05）。11S致敏組仔豬回腸組胺含量極顯著低于其他各處理組（P<0.01），11S口服免疫＋致敏組低于11S注射免疫＋致敏組（P<0.05）。
　　6.仔豬空腸中段中的sIgA陽(yáng)性表

7、達(dá)極顯著高于其他腸段（P<0.01），7S致敏組sIgA陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度更為明顯。在空腸近端，sIgA的陽(yáng)性表達(dá)量顯著高于十二指腸、回腸、空腸末端（P<0.05）；與對(duì)照組相比，致敏組sIgA的陽(yáng)性表達(dá)量均顯著或極顯著升高（P<0.01或P<0.05）。小腸中 sIgA陽(yáng)性表達(dá)的光密度值從強(qiáng)到弱分別為空腸中端、空腸近端、十二指腸、回腸、空腸末端。
　　7.致敏組仔豬小腸組織IgA mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著或者極顯著高于對(duì)照組（P<0.0