ETEC對斷奶腹瀉仔豬胃腸道緊密連接蛋白ZO-1的影響.pdf

1、仔豬早期斷奶技術(shù)是國內(nèi)外集約化和規(guī)模化養(yǎng)豬生產(chǎn)中普遍關(guān)注和采用的先進(jìn)技術(shù)。仔豬在斷奶前后胃腸道微生物區(qū)系發(fā)生了很大變化。目前研究認(rèn)為仔豬早期斷奶后產(chǎn)生腹瀉這一臨床癥狀的主要原因是幼齡仔豬消化道組織及其功能發(fā)育尚未完全成熟，斷奶應(yīng)激易導(dǎo)致仔豬胃腸道功能紊亂，使仔豬胃、腸道屏障受損，從而導(dǎo)致仔豬“斷奶綜合征”的發(fā)生。研究表明：腸黏膜上皮的完整性是仔豬早期斷奶綜合征發(fā)生的關(guān)鍵。腸黏膜屏障包括完整的腸上皮細(xì)胞及其細(xì)胞間連接所構(gòu)成的機(jī)械屏障、腸道

2、正常微生物群所構(gòu)成的生物屏障和腸道相關(guān)淋巴樣組織及其分泌抗體所構(gòu)成的免疫屏障。緊密連接是腸上皮細(xì)胞間的主要連接方式，對維持上皮細(xì)胞極性、調(diào)節(jié)腸屏障的通透性、防止細(xì)菌、內(nèi)毒素和毒性大分子物質(zhì)進(jìn)入體內(nèi)發(fā)揮著重要作用。ZO-1是組織緊密連接的重要組成成分，其表達(dá)上調(diào)可調(diào)節(jié)組織的通透性。因此，在分子生物學(xué)水平上檢測ZO-1的變化對研究斷奶仔豬腹瀉的機(jī)理具有重要的意義，同時(shí)可以降低仔豬斷奶綜合征的發(fā)病率。
　　 研究目的：建立起PCR反應(yīng)

3、體系，可以同時(shí)檢測LT、ST-Ⅰ和ST-Ⅱ三種大腸桿菌毒力因子。檢測緊密連接蛋白ZO-1在斷奶仔豬ETEC性腹瀉時(shí)胃腸道組織中的分布及表達(dá)水平及意義。
　　 實(shí)驗(yàn)方法：本實(shí)驗(yàn)選取24頭斷奶仔豬，攻入ETEC，分別取1d、3d、Sd、7d的胃黏膜、回腸及結(jié)腸組織，采用半定量PCR法摸索反應(yīng)適合的條件，實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測胃腸道緊密連接蛋白ZO-1以及內(nèi)參基因GAPDH的mRNA豐度；采用Western blotting的方

4、法檢測胃腸道緊密連接蛋白ZO-1的蛋白表達(dá)量。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：成功地建立了ETEC腸毒素三種毒力因子LT、ST-Ⅰ和ST-Ⅱ的PCR分子生物學(xué)檢測方法，為研究ETEC性斷奶仔豬腹瀉提供了科學(xué)的理論依據(jù)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果表明：ZO-1 mRNA的表達(dá)水平與組織的分化水平有關(guān)，隨著斷奶仔豬腹瀉程度的加重，ZO-1的表達(dá)率也隨之下降。胃腸道緊密連接蛋白ZO-1在三種組織中均有表達(dá)，可見在攻入ETEC后5d、7d表達(dá)量差異極其明

5、顯，且其表達(dá)量隨著腹瀉時(shí)間的延長逐漸呈降低趨勢；Western blotting結(jié)果表明：ZO-1蛋白表達(dá)量逐漸降低，表達(dá)水平明顯低于內(nèi)參基因的表達(dá)量。
　　 分析總結(jié)：通過本實(shí)驗(yàn)成功的揭示了腸屏障功能調(diào)控的部分分子機(jī)制，對于提升該領(lǐng)域的基礎(chǔ)科學(xué)理論水平具有重要的臨床實(shí)踐意義，而且為斷奶仔豬生產(chǎn)提供了技術(shù)研究平臺，為營養(yǎng)調(diào)控仔豬腸道結(jié)構(gòu)與功能提供了一些理論依據(jù)，為防治“仔豬早期斷奶綜合征”，提高仔豬成活率開辟出了一條新思路，從而