大豆蛋白致仔豬腸道過敏反應(yīng)作用及檢測技術(shù)研究.pdf

1、本文研究了大豆蛋白過敏對仔豬生長性能和腸道功能的影響，分析了大豆蛋白各組分致敏性，在此基礎(chǔ)上鑒定獲得含IgE過敏抗原表位的短肽氨基酸序列，并以其為免疫抗原成功制備了單克隆抗體，為今后開展仔豬腸道健康調(diào)控、大豆蛋白致敏機(jī)理及致敏原檢測技術(shù)研究提供依據(jù)和保障。論文共分三部分:
　　 試驗(yàn)一:大豆蛋白過敏反應(yīng)對仔豬生長性能及腸道功能影響。試驗(yàn)選用品種相同、胎次及體況相近母豬所產(chǎn)仔豬8窩，隨機(jī)分為2組，每組4個(gè)重復(fù)，每重復(fù)1窩。對照組飼

2、喂無大豆蛋白日糧，試驗(yàn)組飼喂含32％去皮豆粕日糧。試驗(yàn)仔豬7日齡補(bǔ)飼，28日齡斷奶，至49日齡結(jié)束。試驗(yàn)結(jié)果表明:(1)與對照組相比，試驗(yàn)組仔豬日增重降低37.5％(P＜0.01)，料重比增加59.9％(P＜0.05);(2)試驗(yàn)組仔豬28、35日齡血清中，二胺氧化酶(DAO)活性分別比對照組提高了22.9％（P＜0.05）、13.6％(P＜0.05)，內(nèi)毒素(ET)濃度分別比對照組提高了37.0％(P＜0.05)、20.0％(P＞0.

3、05)，D-乳酸(D-LAC)濃度分別比對照組提高了30.0％(P＜0.05)、28.0％(P＜0.05)，D-木糖(D-Xylose)濃度則分別降低了29.0％（P＜0.05）、11.1％(P＞0.05)。上述結(jié)果提示由大豆蛋白引起的仔豬過敏反應(yīng)，使仔豬腸道功能受損，營養(yǎng)物質(zhì)吸收減少，有害物質(zhì)進(jìn)入體內(nèi)，最終導(dǎo)致仔豬生長性能下降。
　　 試驗(yàn)二:大豆蛋白IgE抗原表位研究。采用間接ELISA方法遴選大豆蛋白過敏陽性仔豬血清，以其

4、作為一抗采用免疫印跡技術(shù)分析大豆蛋白各組分的致敏性。根據(jù)β-伴大豆球蛋白α亞基氨基酸序列，合成7條短肽，通過致敏性分析，鑒定含IgE抗原表位的短肽。結(jié)果明:(1)免疫印跡圖譜顯示，β-伴大豆球蛋白α、α'、β三個(gè)亞基均可與陽性血清反應(yīng)，是大豆蛋白的主要致敏原組分，可引起IgE介導(dǎo)的過敏反應(yīng)。(2)間接ELISA結(jié)果顯示，7條短肽均能與陽性血清中的IgG產(chǎn)生特異性反應(yīng)，其中肽7的OD值最高（即血清中相應(yīng)的特異性抗體含量最高）;4條短肽能與

5、陽性血清中IgE產(chǎn)生特異性反應(yīng)，同樣肽7的OD值最高（即血清中相應(yīng)的特異性抗體含量最高）。由此可見，本試驗(yàn)所合成的7條短肽中，肽7的致敏性最強(qiáng)，可作為制備單克隆抗體的抗原。
　　 試驗(yàn)三:β-伴大豆球蛋白單克隆抗體制備及鑒定。采用試驗(yàn)二鑒定得到的含IgE抗原表位短肽作為抗原免疫BALB/C小鼠，取免疫小鼠脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，經(jīng)克隆和間接ELISA篩選，獲得了1株穩(wěn)定分泌抗β-伴大豆球蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株