RACE初步克隆胡麻β-酮脂酰-CoA合酶基因以及胡麻再生體系建立的研究.pdf

1、胡麻中超長(zhǎng)鏈脂肪酸具有廣泛的生理功能，它參與種子甘油酯、生物膜膜脂及鞘脂的合成，并為表皮蠟質(zhì)的生物合成提供前體物質(zhì)。超長(zhǎng)鏈脂肪酸的合成由脂肪酰-CoA延長(zhǎng)酶催化，其合成的第一步反應(yīng)--縮合反應(yīng)是限速步驟，由β-酮脂酰-CoA合酶(KCS)催化。目前，人們對(duì)脂肪酸延長(zhǎng)酶基因的研究主要集中在KCS基因上。本實(shí)驗(yàn)首先利用簡(jiǎn)并引物獲得胡麻β-酮脂酰-CoA合酶基因的DNA片段，并將預(yù)期得到的β-酮脂酰-CoA合酶基因命名為FKCS。再以此DNA

2、片段為基礎(chǔ)，利用3'RACE反應(yīng)從胡麻葉片中克隆到FKCS的1082bp的cDNA片段，NCBI的ORF分析表明，它含有一個(gè)長(zhǎng)度為822bp的開(kāi)放閱讀框和252bp完整的3’UTR。由于本實(shí)驗(yàn)中的5'RACE沒(méi)有得到相應(yīng)目的片段，僅通過(guò)3'RACE反應(yīng)獲得的cDNA推測(cè)出FKCS的273個(gè)氨基酸，位于FKCS的C端。序列同源性分析表明，F(xiàn)KCS所編碼的蛋白質(zhì)，其氨基酸序列與擬南芥中五種β-酮脂酰-CoA合酶有較高的同源性。通過(guò)系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)

3、分析得知，F(xiàn)KCS與擬南芥KCS家族中親緣關(guān)系最近的是KCS-1。而擬南芥的KCS-1主要與超長(zhǎng)鏈脂肪酸的合成有關(guān)，因此推測(cè)胡麻中FKCS也與超長(zhǎng)鏈脂肪酸的合成有關(guān)，F(xiàn)KCS可能是胡麻中一種新型的β-酮脂酰-CoA合酶。FKCS基因的克隆和測(cè)序?yàn)閷?lái)研究其在胡麻中的生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。為了便于以后研究FKCS基因的功能，以胡麻的下胚軸為外植體，成功建立了胡麻的快繁再生體系：MS+300㎎/L水解酪蛋白+0.5㎎/L6-BA有利于愈傷組