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文檔簡(jiǎn)介
1、香雪蘭(Fressia hybrida)屬鳶尾科香雪蘭屬多年生球根草本花卉植物,其花色艷麗、花香濃郁,是深受人們喜愛的切花之一。查爾酮合成酶(Chalcone synthase,CHS)是花色苷生物合成代謝途徑的第一個(gè)關(guān)鍵酶,與植物花色的形成密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)克隆了香雪蘭CHS基因的cDNA序列和DNA序列,為植物花色研究奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:
1.從紅花香雪蘭花瓣cDNA文庫中隨機(jī)挑取單克隆進(jìn)行單向測(cè)序,得到165個(gè)序列,去
2、除低質(zhì)量和載體污染序列后共獲得137個(gè)有效序列,序列長度在370-730bp之間。序列拼接后生成85個(gè)單拷貝序列,將85個(gè)序列用NCBI的blastx程序和EBI的fastx程序與蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)后,有79個(gè)序列比對(duì)出同源蛋白,占序列的93%。在比對(duì)出的同源蛋白中,有4個(gè)蛋白與花色形成相關(guān)。其中一個(gè)蛋白為查爾酮合酶,相對(duì)應(yīng)的cDNA片段為香雪蘭查爾酮合酶基因cDNA3端序列。其余6個(gè)序列未比對(duì)出同源性基因,推斷這6個(gè)序列為新的基因片
3、段,可能是香雪蘭中特異性表達(dá)的基因。
2.以紅花香雪蘭花瓣為實(shí)驗(yàn)材料,通過香雪蘭花瓣cDNA文庫的EST分析及RACE技術(shù)克隆了香雪蘭CHS基因的cDNA序列,命名為FhCHS,Genbank登錄號(hào)為JF732897。序列分析表明該序列長為1240bp,開放閱讀框長1170bp,推測(cè)其編碼389個(gè)氨基酸。預(yù)測(cè)其編碼蛋白分子量為42.6kDa,等電點(diǎn)為5.74。FhCHS氨基酸序列的同源性和系統(tǒng)發(fā)育樹分析表明,F(xiàn)hCHS基因是植
4、物查爾酮合酶基因家族中的一個(gè)新成員。
3.以香雪蘭基因組DNA為模板,克隆了香雪蘭CHS基因DNA序列,該序列全長為1369bp,Genbank登錄號(hào)為JF732898。序列分析表明,該DNA序列包含一個(gè)內(nèi)含子和兩個(gè)外顯子,這是CHS基因的一個(gè)典型特征。內(nèi)含子長為129bp,位于第60位半胱氨酸密碼子的內(nèi)部,內(nèi)含子兩端的剪切位點(diǎn)符合GT-AG法則。
4.構(gòu)建了FhCHS的重組原核表達(dá)載體pET28a-FhCHS,大腸
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