桂花查爾酮異構(gòu)酶基因OfCHI的克隆與表達(dá)分析.pdf

1、桂花(Osmanthus fragrans Lour.)是一種四季常青的小型樹種，是我國本有的樹種，具有悠久的歷史。如今，我國對于桂花的研究非常廣泛和深入，也取得了舉世矚目的成果。2004年，我國被授予“桂花品種國際登錄權(quán)威”，此為我國的第二個此類權(quán)威。桂花品種豐富，其品種可根據(jù)花色的不同進(jìn)行歸類及區(qū)分。其顏色由淺到深主要是從乳白色到橙紅色。桂花的花色是其品種分類的一項主要依據(jù)，對于桂花花色的研究在其分類及品種鑒定上有重大的意義。還能為

2、桂花新品種的培育和繁殖奠定理論基礎(chǔ)，推動桂花新品種的繁育，促進(jìn)桂花產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。
　　桂花中的色素主要是類黃酮，花青苷是類黃酮中的一種，它是花色形成的主要物質(zhì)。目前，有關(guān)桂花花色方面的報道相對較少，對桂花中花青苷的研究更為少見。為探究花青苷含量對桂花花色的影響，花青苷合成相關(guān)酶CHI基因在花青苷合成途徑中的作用以及CHI基因在桂花不同組織中的表達(dá)情況，本研究以‘橙紅丹桂’、‘金桂’、‘早銀桂’3個桂花品種為試驗材料，測定了3個品種桂

3、花的花青苷含量，同時，利用RACE技術(shù)克隆了CHI基因Of CHI的cDNA全長，并且利用RT-PCR技術(shù)分析了CHI基因在3種桂花中及在不同組織中的表達(dá)特性。試驗獲得的主要結(jié)果如下:
　　(1)以‘金桂’花瓣cDNA為模板，利用RACE技術(shù)克隆了桂花中CHI基因的序列。CHI基因序列全長為1069bp，5’非編碼區(qū)96bp，3’非編碼區(qū)226bp和開放閱讀框747bp，編碼一個含有249個氨基酸的蛋白質(zhì)。將其命名為OfCHI，G

4、eneBank登錄號為KR815815。氨基酸序列上存激活位點:Arg-38，Gly-39，Leu-40,Phe-49,Thr-50,Tyr-108,Lys-111,Val-112,Asn-115,and Cys-116。
　　(2)運用qRT-PCR的方法對OfCHI在不同桂花品種、不同組織中的表達(dá)量進(jìn)行檢測。對桂花不同品種的表達(dá)特性進(jìn)行分析，基因在桂花中的表達(dá)量于花青苷的含量呈正相關(guān)。對桂花不同器官中的表達(dá)特性進(jìn)行分析，Of

5、CHI在3種桂花中均表現(xiàn)為在葉中表達(dá)量最大，并遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于莖和花，莖中次之，花中最低。顯著性分析可知，在3種桂花中，葉中的表達(dá)量與花和莖差異性均達(dá)到顯著水平，而花和莖之間的差異性不顯著。
　　(3)用pH示差法對不同桂花品種花瓣中的花青苷含量進(jìn)行了檢測。‘橙紅丹桂’的花青苷含量最高，為1.57mg/100g，‘金桂’與‘早銀桂’的花青苷含量較低，分別為:0.19mg/100g和0.06mg/100g?！燃t丹桂’花青苷含量與‘金桂’和