導入高賴氨酸蛋白質(zhì)基因改良水稻種子的營養(yǎng)品質(zhì).pdf

1、根據(jù)水稻谷蛋白(GluB-1,GeneBank序號X54314)基因的序列,設(shè)計了l對引物,利用PCR方法擴增出水稻谷蛋白(GluB-1)基因的啟動子序列.分別利用能夠在種子中特異性表達的水稻谷蛋白啟動子和玉米醇溶蛋白啟動子、高賴氨酸蛋白質(zhì)基因cDNA和篩選基因nptⅡ基因構(gòu)建了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化用表達載體pCGK和pCl9ZK.利用能夠在種子中特異性表達的玉米醇溶蛋白啟動子、高賴氨酸蛋白質(zhì)基因cDNA、篩選基因bar基因和核骨架結(jié)合序列(MA

2、R)構(gòu)建了基因槍轉(zhuǎn)化用表達載體p19ZKBAR和p19ZKMAR,表達載體p19ZKMAR與表達載體p19ZKBAR結(jié)構(gòu)的不同之處是載體p19ZKMAR的目的基因兩端連接有核骨架結(jié)合序列(MAR).用農(nóng)桿菌介導法分別將植物表達載體pCl9ZK和pCGK導入水稻品種龍?zhí)馗的成熟胚誘導的愈傷組織中.獲得再生植株178株.PCR和Southern blot檢測表明,轉(zhuǎn)化表達載體pCl9ZK獲得轉(zhuǎn)基因植株24株,轉(zhuǎn)化表達載體pCGK獲得轉(zhuǎn)基因

3、植株l株.用基因槍轟擊法將植物表達載體p19ZKBAR和p19ZKMAR導入龍?zhí)馗的成熟胚誘導的愈傷組織和中優(yōu)早5號的幼胚中.共獲得再生植株64株,PCR檢測16株呈陽性(龍?zhí)馗 5株,中優(yōu)早5號1l株),其中轉(zhuǎn)化表達載體p19ZKMAR未獲得轉(zhuǎn)基因植株.用葉片涂抹除草劑法檢測了Tl代轉(zhuǎn)基因植株中外源基因在轉(zhuǎn)基因植株后代中的表達和分離情況,檢測了15個株系群體共160株,抗性植株有8l株(龍?zhí)馗 19株,中優(yōu)早5號62株),各個株

4、系中抗性苗的比例(25﹪~80﹪)不同.Southern blot檢測30株呈陽性(龍?zhí)馗 7株,中優(yōu)早5號23株).Western-blot分析了12株轉(zhuǎn)基因成熟種子中蛋白質(zhì)的積累情況,結(jié)果表明高賴氨酸蛋白質(zhì)基因在水稻中得到了表達,在50 ku處出現(xiàn)了與對照位置一致的條帶.對基因槍轉(zhuǎn)化表達載體p19ZKBAR產(chǎn)生的部分Tl代轉(zhuǎn)基因植株成熟種子進行的分析結(jié)果表明,中優(yōu)早5號轉(zhuǎn)基因種子中蛋白質(zhì)含量(12.07﹪~16.20﹪)平均提高了

5、35.18﹪,蛋白質(zhì)中賴氨酸的含量(4.02﹪~4.35﹪)平均提高了7.42﹪,龍?zhí)馗轉(zhuǎn)基因種子中蛋白質(zhì)含量(11.92﹪~12.87﹪)平均提高了27.69﹪,種子干重中賴氨酸的含量(0.51﹪~0.57﹪)平均提高了16.15﹪.對用農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化pCl9ZK產(chǎn)生的部分T0代龍?zhí)馗轉(zhuǎn)基因植株成熟種子的分析結(jié)果表明,種子中蛋白質(zhì)含量(10.87﹪~13.16﹪)平均提高了22.03﹪,種子干重中賴氨酸的含量(0.47﹪~0.6