多基因聚合的高賴氨酸轉基因水稻的選育及評價.pdf

1、目錄摘要1Abstract3符號說明51文獻綜述611必需氨基酸612賴氨酸的作用和營養(yǎng)價值713植物中賴氨酸的生物合成與分解代謝7131天冬氨酸的代謝途徑81311天冬氨酸激酶(AK)91312二氫吡啶二羧酸合酶(DHPS)10132賴氨酸分解代謝途徑1014代謝工程提高植物中賴氨酸含量的研究進展13141增加賴氨酸的生物合成13142降低賴氨酸的分解調控14143在增加賴氨酸合成同時減少賴氨酸分解1415提高賴氨酸含量后的連帶效應1

2、516本研究目的及其意義一162材料與方法1721實驗材料17211水稻材料17212雜交選育18213PCR引物18214生化試劑和儀器1922葉片潮霉素抗性檢測192_3PCR的分析2023。1水稻葉片總DNA的提取20232PCR的擴增2024半定量RTPCR20241水稻葉片中總RNA提取20242水稻胚乳中總RNA提取21243反轉錄獲得第一鏈cDNA21244半定量RTPCR2125實時熒光定量PCR2226稻米樣品前處理2

3、227種子氨基酸含量的分析22271稻米中總氨基酸含量的測定22272稻米中游離氨基酸含量的測定2328稻米理化品質性狀的測定23281糊化溫度的測定23282直鏈淀粉含量的測定23283膠稠度的測定24陳錦珠多基因聚合的高賴氨酸轉基因水稻的選育及評價多基因聚合的高賴氨酸轉基因水稻的選育及評價碩士研究生：陳錦珠＼㈣指導老師：劉巧泉教授(揚州大學，江蘇揚州225009)摘要水稻是最重要的糧食作物之一，是世界半數(shù)人口賴以生存的主要食物；也是

4、我國第一大糧食作物，面積約占全國糧食作物總面積的30％，其總產(chǎn)約占糧食總產(chǎn)量的40％。隨著生活水平的提高人們對稻米營養(yǎng)品質也越來越關注，衡量稻米營養(yǎng)品質的指標主要是稻米中蛋白質和氨基酸組成，而水稻種子中蛋白質含量僅占粒重的5～10％，賴氨酸僅占蛋白質的35一40％，是第一限制性必需氨基酸。因此，提高水稻賴氨酸含量一直是水稻育種家追求的主要目標之一。本實驗室在前期通過基因工程手段對水稻中賴氨酸合成和降解途徑分支點上關鍵酶的表達進行調控，達

5、到了提高稻米中游離賴氨酸含量的目的，也成功獲得了相應的轉基因水稻純合系，并在此基礎上通過雜交聚合方式獲得了不同基因聚合的轉基因水稻純合白交系。本研究以這些轉基因及其基因聚合系為材料，進行了基因表達、賴氨酸含量、稻米外觀品質和理化品質等方面的分析，以為后期高賴氨酸水稻的選育和利用奠定基礎。主要研究結果如下：1、轉基因水稻純合系以及聚合系的選育。通過幾年的努力，本實驗室已經(jīng)獲得了以武香粳9號為受體的含不同外源基因口K、DHPS、LKRRNA

6、i)的系列轉基因水稻純合系，如：GR65、GR14、35S15等，在此基礎上，本研究為了探究進一步提高轉基因稻米中賴氨酸含量的方法，將轉基因水稻純合系35S15分別與GR65、GR一14進行雜交配組選育，經(jīng)過多代篩選，獲得純合的聚合基因系35S15／GR一14、GR65／35S15等。以武香粳9號為受體的系列轉基因水稻聚合基因系和抗條武育粳3號為親本進行雜交，篩選雜交后代，獲得抗條紋葉枯病的純合轉基因系RWY3／(35S15／GR14)