水稻OsSRT基因的轉(zhuǎn)基因后代的遺傳特性及生理表現(xiàn)的研究.pdf

1、真核生物中，核小體為染色體的結(jié)構(gòu)單位，它是由DNA和組蛋白組成。組蛋白存在于染色質(zhì)中，為堿性蛋白質(zhì)，在細(xì)胞核中起到著重要的作用。近些年蛋白質(zhì)修飾成為研究的熱點(diǎn)，包括甲基化、糖基化和乙酰化等。其中組蛋白乙?；揎椖壳把芯枯^少，它是由組蛋白乙酰化轉(zhuǎn)移酶催化完成，與之相關(guān)的還有組蛋白去乙?；竵?lái)介導(dǎo)組蛋白實(shí)現(xiàn)去乙?；咄ㄟ^(guò)影響細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄過(guò)程對(duì)染色體的結(jié)構(gòu)修飾以及基因的表達(dá)調(diào)控發(fā)揮重要作用，處于動(dòng)態(tài)平衡。所有真核生物中都有組蛋白去乙?；?/p>

2、，它可以使細(xì)胞轉(zhuǎn)錄不能正常進(jìn)行，從而對(duì)染色體結(jié)構(gòu)修飾和基因的表達(dá)調(diào)控發(fā)揮重要的作用，但具體在植物的生長(zhǎng)發(fā)育中起到什么樣的作用我們還不是很清楚，這也正是本試驗(yàn)研究的重點(diǎn)。
　　組蛋白去乙?；阜譃镽PD3/HDA1、HD2和SIR2三個(gè)亞家族，本試驗(yàn)的OsSRT1（登錄號(hào)Ak069000.1）基因是水稻中與SIR2同源的基因，本試驗(yàn)使用帶有目的基因OsSRT1的工程菌株，以根瘤農(nóng)桿菌介導(dǎo)法侵染擬南芥和水稻，培育OsSRT1超表達(dá)擬南

3、芥和水稻植株。對(duì)水稻愈傷組織進(jìn)行了侵染轉(zhuǎn)化，對(duì)侵染的愈傷組織進(jìn)行篩選，完成再生分化，最終分化成苗。提取了轉(zhuǎn)基因水稻的總RNA，通過(guò)RT-PCR篩選最終得到轉(zhuǎn)基因水稻植株。為了研究OsSRT1基因的功能以及與脅迫的關(guān)系，本試驗(yàn)選取T2-OsSRT1-16品系超表達(dá)擬南芥以及OsSRT1同源區(qū)干擾擬南芥(Ossrt1-1，Ossrt-2)的生理生化數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比，揭示水稻中該基因的功能。從而了解目的基因在植物脅迫中的作用機(jī)理，對(duì)脅迫下提高植物

4、抗逆能力具有重要的科學(xué)意義。
　　遺傳表現(xiàn)結(jié)果如下，超表達(dá)擬南芥T2-OsSRT1-16和T2-Ossrt1擬南芥的生長(zhǎng)狀況存在很大差異，正常條件培養(yǎng)時(shí)，T2-OsSRT1-16擬南芥對(duì)比其他三組生長(zhǎng)狀況最好，葉片較大，根系較為發(fā)達(dá)，而T2-Ossrt1擬南芥則生長(zhǎng)狀況最差，表現(xiàn)為莖葉較小顏色偏黃綠色，根系較短，在逆境條件下，NaCl濃度為100mmol/L時(shí)差異明顯，T2-OsSRT1-16擬南芥的鮮重和根長(zhǎng)都明顯高于T2-Os

5、srt1擬南芥和對(duì)照組擬南芥，NaHCO3濃度為10 mmol/L時(shí)根長(zhǎng)和鮮重差異明顯，T2-OsSRT1-16擬南芥＞對(duì)照組擬南芥＞T2-Ossrt1擬南芥。
　　采用NaCl和NaHCO3做代表來(lái)測(cè)定T2-OsSRT1-16擬南芥和T2-Ossrt1擬南芥在逆境條件下的生理表現(xiàn)。分別測(cè)定了了每個(gè)濃度下擬南芥的脯氨酸含量、可溶性蛋白含量、電導(dǎo)率、葉綠素以及過(guò)氧化氫酶活性，結(jié)果顯示，在NaCl和NaHCO3脅迫下，轉(zhuǎn)OsSRT1基

6、因超表達(dá)的擬南芥的生理生化指標(biāo)要優(yōu)于對(duì)照組和RNAi擬南芥。
　　經(jīng)過(guò)對(duì)水稻成熟胚愈傷組織再生方法的研究，誘導(dǎo)出水稻愈傷組織并且成功篩選分化成苗，得到轉(zhuǎn)基因水稻T0-OsSRT1，提取水稻總RNA利用RT-RCR法對(duì)水稻進(jìn)行轉(zhuǎn)基因分子檢測(cè)，結(jié)果顯示OsSRT1基因成功整合到水稻中，可以進(jìn)行正常的轉(zhuǎn)錄。選取表現(xiàn)比較強(qiáng)的T0-OsSRT1-2品系轉(zhuǎn)基因水稻和對(duì)照組水稻進(jìn)行了鹽堿脅迫，NaCl和NaHCO3脅迫下，T0-OsSRT1-2