基因槍介導的棉花遺傳轉化及后代遺傳分析.pdf

1、本研究選用優(yōu)良的陸地棉品種GW2031和農大KB18為受體材料，利用基因槍介導的方法，將含有根特異表達性啟動子的phyA基因轟擊入供試品種的莖尖分生組織中，經過卡那霉素抗性篩選，PCR、PCR-Southen和Southern斑點雜交等技術分析，獲得了兩個品種的轉基因植株，并得到了轉基因植株的T<,1>代和T<,2>代，進一步對轉基因植株的后代進行了遺傳和根系植酸酶活性的分析，為棉花現代分子育種增添新的內容和新的種質材料，同時為農作物有

2、效利用土壤有機磷資源開辟一條經濟有效的途徑。主要研究結果如下： 1．通過優(yōu)化培養(yǎng)基中各種成分，建立了成苗培養(yǎng)基。在莖尖培養(yǎng)中發(fā)現了外源激素GA<,3>和NAA的顯著作用，GA<,3>對莖尖分生組織基部的愈傷有較好的抑制作用，而NAA對莖尖的生根具有一定的作用。 2．本試驗從基因槍轟擊到獲得經PCR分析獲得轉基因植株共用了將近兩個月的時間，縮短了轉化和鑒定周期，確定了最適合篩選兩個品種的卡那霉素濃度梯度，即85、95、11

3、0、120、130、140mg/L，并獲得了卡那霉素抗性植株共39株，其中1株GW2031，38株農大KB18。PCR-Southern驗證的轉化植株共有32株，其中1株GW2031，31株農大KB18，最終轉化率分別為1.59％和5.23％。 3．對農大KB18轉基因單株1和單株2的部分單株做了Southern斑點雜交分析，發(fā)現不同時期的DNA雜交信號強度有很大的差異，其中棉葉幼嫩時提取的DNA其雜交驗證效果較好。 4