基因槍介導(dǎo)的抗體-乳鐵蛋白融合基因和RNAi片段轉(zhuǎn)化小麥的研究.pdf

1、小麥?zhǔn)且环N在世界上廣泛種植的糧食作物，對(duì)人類糧食供應(yīng)起著至關(guān)重要的作用。然而，由于赤霉病的危害，小麥產(chǎn)量往往會(huì)受到嚴(yán)重影響。小麥赤霉病(FusariumHead Blight，F(xiàn)HB)是由禾谷鐮刀菌引起的真菌病害，給我國(guó)南方麥區(qū)，特別是長(zhǎng)江中下游地區(qū)的小麥生產(chǎn)帶來(lái)了很大損失。小麥感染赤霉病后，不僅使產(chǎn)量和品質(zhì)下降，而且由于病菌的代謝產(chǎn)物中含有毒素，人畜食用后還會(huì)中毒，危害人、畜健康。采用傳統(tǒng)的小麥育種方法來(lái)降低赤霉病對(duì)小麥的危害，雖然也

2、可以取得一定成效，但由于小麥種質(zhì)資源中抗赤霉病資源匱乏，使培育高抗赤霉病小麥新品種難度較大。針對(duì)這一難題，本研究借助基因槍介導(dǎo)法，將赤霉病抗性基因?qū)胄←湥Y選獲得抗赤霉病小麥植株，為選育抗赤霉病小麥新品種和分析抗性機(jī)理提供材料，具有理論意義和應(yīng)用價(jià)值。
　　本研究選用赤霉病抗性基因 BLF-A6、RNAi-chs3、RNAi-pkc-chs3、plsAs6-chs3bAs1及pkcAs3-chs3bAs1等，經(jīng)基因槍轟擊導(dǎo)入小麥

3、品種襄麥76，經(jīng)鑒定獲得了含有上述基因的轉(zhuǎn)基因植株。主要結(jié)果如下:
　　1.抗體-乳鐵蛋白融合基因BLF-A6和RNAi-chs3轉(zhuǎn)化襄麥76。利用多基因共轉(zhuǎn)化技術(shù)，將含有BLF-A6、RNAi-chs基因的最小表達(dá)框和篩選標(biāo)記基因Bar導(dǎo)入襄麥76，在Bialaphos篩選壓存在下生長(zhǎng)的抗性植株，經(jīng)PCR鑒定后共獲得4株T0代陽(yáng)性植株;其中3個(gè)T0代單株在后代得以穩(wěn)定遺傳并同時(shí)含有兩個(gè)基因，1個(gè)T0代在T1代中基因BLF-A6發(fā)

4、生分離，只含有一個(gè)目的基因RNAi-chs3，它們均能穩(wěn)定遺傳。這批轉(zhuǎn)化材料目前已處于T3代。
　　2.抗體-乳鐵蛋白融合基因BLF-A6和RNAi-pkc-chs3轉(zhuǎn)化襄麥76。將這個(gè)基因組合和篩選標(biāo)記6-磷酸異構(gòu)酶基因PMI的最小表達(dá)框混合，以基因槍介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入小麥，經(jīng)過(guò)甘露糖篩選和PCR鑒定共獲得2個(gè)T0代植株，均只含有抗體-乳鐵蛋白融合基因BLF-A6。目前這批轉(zhuǎn)化材料處于T2代。
　　3.抗體-乳鐵蛋白融合基因BLF

5、-A6、plsAs6-chs3bAs1和pkcAs3-chs3bAs1轉(zhuǎn)化襄麥76。同上以基因槍介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法，將上述三個(gè)基因和篩選標(biāo)記基因PMI的最小表達(dá)框一起導(dǎo)入小麥，在甘露糖存在條件下篩選，經(jīng)PCR鑒定，共獲得了5個(gè)T0代陽(yáng)性植株，其中2株含有上述所有三個(gè)基因，3株含有兩個(gè)基因plsAs6-chs3 bAs1、pkcAs3-chs3bAs1。葉片接種赤霉菌的結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因植株赤霉病抗性顯著提高。這批材料目前也處于T2代。