基因槍和農(nóng)桿菌介導(dǎo)MiR396基因?qū)π←溒贩N的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、小麥?zhǔn)鞘澜缟献钪匾募Z食作物之一，與水稻等其它作物相比，其分子生物學(xué)研究相對(duì)困難與滯后。然近幾年在產(chǎn)量提高，品質(zhì)改善，抗逆性增強(qiáng)等方面的研究都取得一定進(jìn)展。microRNA是真核生物體內(nèi)普遍存在的一類非編碼小分子RNA，它們通過堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式介導(dǎo)靶mRNA的降解或是阻遏靶mRNA的翻譯來(lái)參與基因的調(diào)控，從而影響植物的生長(zhǎng)和發(fā)育。MiRNA也以不同的方式參與植物生物和非生物脅迫的逆境響應(yīng)。前人研究表明miR396不僅影響植物的葉長(zhǎng)、分

2、蘗數(shù)、節(jié)間長(zhǎng)、花粉量等農(nóng)藝性狀，還與植物抗旱、耐鹽密切相關(guān)。也有研究表明miR396與植物的春化作用有關(guān)，對(duì)于一些需經(jīng)過低溫春化才能開花的植物在miR396基因的作用下不經(jīng)過此過程就能開花。為創(chuàng)制優(yōu)異的小麥育種新材料，提高小麥品種遺傳改良之效率，獲得不需經(jīng)過低溫春化就能開花的小麥植株。本研究利用基因槍和農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法將來(lái)源于水稻的miR396基因轉(zhuǎn)入不同小麥品種中，以期獲得農(nóng)藝性狀或抗逆性優(yōu)良的轉(zhuǎn)基因株系，使miR396這一優(yōu)良

3、基因資源得到有效利用。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)基因槍法介導(dǎo)miR396轉(zhuǎn)基因小麥植株的獲得與鑒定
　　以華麥2566、華麥2152、隴春23、科農(nóng)199和鄭麥9023為受體材料，用基因槍法將miR396基因轉(zhuǎn)化到以上小麥品種中。最終獲得39株小麥再生植株，其中包含6株華麥2566，18株科農(nóng)199，15株隴春23。經(jīng)過PCR初步檢測(cè)，共獲得7株陽(yáng)性植株，其中有5株來(lái)源于科農(nóng)199，2株來(lái)源于隴春23。其他小麥品種的轉(zhuǎn)化

4、材料中均未檢測(cè)到陽(yáng)性株系。
　　(2)農(nóng)桿菌介導(dǎo)miR396轉(zhuǎn)基因小麥植株的獲得與鑒定
　　以華麥2566、科農(nóng)199、隴春23、硬粒小麥品種LDN為受體材料，用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將miR396基因轉(zhuǎn)入以上小麥品種中，一共獲得11株再生植株，但僅得到2株來(lái)源于硬粒品種LDN的陽(yáng)性株系，這可能是陽(yáng)性植株的花粉育性受到影響所致，現(xiàn)未獲得轉(zhuǎn)基因后代種子。同時(shí)觀察發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性植株分蘗數(shù)顯著減少，其育性及分蘗表型是否與miR396的導(dǎo)入有關(guān)還有