基因槍法介導(dǎo)的OsNACl、GAFP和ThpI基因轉(zhuǎn)化小麥的研究.pdf

1、我國(guó)近代農(nóng)業(yè)快速發(fā)展，小麥已成為我國(guó)種植量第二的糧食作物，每年的總產(chǎn)量基本保持在10億噸左右。但是目前我國(guó)耕地面積大量減少且耕地的鹽漬化越來(lái)越嚴(yán)重，同時(shí)因氣候變化產(chǎn)生的高溫、干旱而影響了小麥的高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)，所以如何提高小麥的抗逆、抗凍和抗病蟲害能力是研究的熱點(diǎn)。
　　 通過(guò)轉(zhuǎn)基因方法可以將來(lái)自不同生物的相關(guān)抗逆、抗病蟲基因?qū)胄←?，從而提高小麥的抗逆性和抗病蟲性。小麥轉(zhuǎn)基因常用的三種方法是:基因槍法、農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和花粉管通道法。因?yàn)?/p>

2、基因槍法有無(wú)宿主限制、受體范圍廣、植株再生率高、操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，所以目前小麥轉(zhuǎn)基因大多采用基因槍法來(lái)進(jìn)行轉(zhuǎn)化。
　　 現(xiàn)在有很多研究都致力于尋找優(yōu)秀的目的基因轉(zhuǎn)入小麥，來(lái)提高小麥的抗逆性、抗病蟲性和品質(zhì)。本研究的目的基因有三種:OsNACl、GAFP、ThpI基因。OsNACl是從水稻中克隆出一個(gè)抗旱耐鹽的轉(zhuǎn)錄因子基因，可以提高植物的抗鹽耐旱性;GAFP基因編碼的天麻抗真菌蛋白GAFP是從天麻球莖外層組織中分離純化的一種能強(qiáng)烈抑

3、制真菌生長(zhǎng)的蛋白，能夠提高小麥的抗病性;ThpI基因編碼一種云杉卷葉蛾抗凍蛋白，可以提高小麥的抗凍性。本研究以寧麥13為受體，利用基因槍法將OsNACl、GAFP和ThpI基因轉(zhuǎn)入小麥中。主要結(jié)果如下:
　　 1、OsNACl、GAFP和ThpI基因轉(zhuǎn)化寧麥13
　　 (1)利用基因槍法將OsNACl、GAFP和ThpI基因轉(zhuǎn)入小麥，均獲得再生植株;再生頻率分別為7.9％、7.3％和10.5％。
　　 (2)對(duì)T

4、(0)代再生植株進(jìn)行PCR檢測(cè)。轉(zhuǎn)OsNACl獲得了14株陽(yáng)性苗，GAFP獲得了1株陽(yáng)性苗，ThpI獲得4株陽(yáng)性苗。轉(zhuǎn)化率分別為:0.82％、0.21％、0.85％。
　　 2、對(duì)轉(zhuǎn)化OsNACl的T1代的檢測(cè)和抗逆性鑒定
　　 (1)對(duì)T1代植株進(jìn)行PCR檢測(cè)，出現(xiàn)7條陽(yáng)性條帶，說(shuō)明目的基因轉(zhuǎn)入。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)進(jìn)一步證明目的基因在T1代轉(zhuǎn)基因植株中的表達(dá)量增加;
　　 (2)對(duì)轉(zhuǎn)基因T1代幼苗和對(duì)照