小麥基因槍遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)體系的建立及葉片衰老抑制基因P-,SAG12--IPT的轉(zhuǎn)化.pdf

1、　　本試驗(yàn)利用基因槍法和花粉管通道法兩種植物遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)，將葉片衰老抑制基因PSAGI2-IPT導(dǎo)入有早衰現(xiàn)象的小麥品系9848,獲得轉(zhuǎn)基因植株。通過(guò)對(duì)基因槍法轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)的建立和兩種轉(zhuǎn)化法的深入研究，初步建立起了一套完整的小麥轉(zhuǎn)基因技術(shù)體系。主要研究結(jié)果如下：1.普通小麥基因轉(zhuǎn)化中良好受體系統(tǒng)的建立:對(duì)影響小麥幼胚愈傷組織高頻率再分化的條件進(jìn)行了研究。2.基因槍轉(zhuǎn)化的影響因素研究:用PDS-1000/He型基因槍將抑制葉片衰老基因PS

2、AGI2-IPT轉(zhuǎn)入小麥幼胚和愈傷組織中，通過(guò)對(duì)報(bào)告基因GUS瞬時(shí)表達(dá)的檢測(cè)，研究了金粉用量、質(zhì)粒DNA用量及轟擊次數(shù)對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響。3.基因槍法轉(zhuǎn)化:首次利用PDS1000/He基因槍將將帶有NPT基因PASAGI2-IPT基因的質(zhì)粒pCMLA35-1導(dǎo)人小麥9848的幼胚細(xì)胞和愈傷組織.然后在含有40mg/L卡那霉素的培養(yǎng)基上篩選農(nóng)農(nóng)與分化.從1870個(gè)幼胚和682塊愈傷組織中分別獲得65株和18株抗性綠苗。作PASAGI2-IPT

3、基因的PCR擴(kuò)增，只從轉(zhuǎn)化未成熟幼胚來(lái)源的抗性植株中鑒定出2株陽(yáng)性植株，平均轉(zhuǎn)化率為0.107﹪，而從轉(zhuǎn)化愈傷組織來(lái)源的抗性植株沒有得到陽(yáng)性植株。4.花粉管通道法轉(zhuǎn)化:采用100，300，500，700ng/uL四種質(zhì)粒DNA濃度，將帶有NPTII基因PASAGI2-IPT基因的質(zhì)粒pCMLA35-1通過(guò)花粉管通道途徑轉(zhuǎn)化小麥9848。結(jié)果表明：利用花粉管通道法對(duì)小麥進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，當(dāng)代小麥的結(jié)實(shí)率隨質(zhì)粒DNA濃度的升高明顯降低；種子田間