轉(zhuǎn)多基因水稻耐鹽株系鑒定與評價.pdf

1、土壤鹽漬化是嚴(yán)重的非生物脅迫因素之一，很大程度的限制作物生長。我國鹽漬土約3億畝，占全國耕地面積的1/4，隨著社會工業(yè)發(fā)展、自然氣候變化和水資源短缺，土地的鹽漬化日益加劇，嚴(yán)重制約著農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展。水稻是我國重要的糧食作物，占我國糧食總產(chǎn)量的40％。水稻的生長受多種脅迫因素的影響，其中土壤鹽漬化更是制約水稻生產(chǎn)產(chǎn)量。長期以來，國內(nèi)外廣泛開展了對鹽漬土的改良和利用的研究，人們運(yùn)用基因手段，從植物中分離克隆了可耐鹽的相關(guān)重要基因，培植

2、轉(zhuǎn)基因耐鹽作物。相關(guān)耐鹽基因的研究不但可以探索植物耐鹽機(jī)制，還可以開發(fā)利用生植物耐鹽基因資源，為培育耐鹽農(nóng)作物品種奠定基礎(chǔ)。通過利用基因手段，提高水稻的耐鹽能力，具有深遠(yuǎn)的應(yīng)用前景。
　　本研究前期以優(yōu)育29號水稻為試驗(yàn)材料，將水稻愈傷組織作為外植體建立了愈傷組織受體系統(tǒng)的高頻再生體系，優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的水稻遺傳轉(zhuǎn)化體系，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化法將載體KETG(ICE1-LOS5-CBF3-ABAR-NCED3)多基因轉(zhuǎn)入水稻，獲得

3、了轉(zhuǎn)多基因優(yōu)育29號植株。本研究以轉(zhuǎn)基因植株的T3代種子為試驗(yàn)材料，對獲得的轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行分子檢測和耐鹽性鑒定，主要研究結(jié)果如下:
　　1.首次以優(yōu)育29號T3代種子為試驗(yàn)材料，獲得12K10、12K12、12K26、12K38四個轉(zhuǎn)基因株系的基因組DNA，用ICE1、LOS5、CBF3、ABAR、NCED3基因的特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，選取的植株基因組中均擴(kuò)增出大小一致的目的條帶，表明目的基因已經(jīng)整合到水稻基因組中。
　

4、　2.125mmol/LNaC1脅迫處理24h后，以已提取的12K10、12K12、12K26、12K38四個株系的cDNA為模板，以actin為內(nèi)參，用ICE1、LOS5、CBF3、ABAR、NCED3基因的特異性引物進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物用1.0％的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測，選取的植株基因組中均擴(kuò)增出大小一致的目的條帶，表明目的基因均已在轉(zhuǎn)基因植株中得到表達(dá)。
　　3.在125mmol/L的NaC1脅迫下7d之后，四個轉(zhuǎn)