柑橘全爪螨抗藥性監(jiān)測(cè)及其細(xì)胞色素P450基因的克隆.pdf

1、柑橘全爪螨Panonychus citri(McGregor)是一種對(duì)柑橘危害嚴(yán)重的世界性害螨。該螨的抗藥性問(wèn)題已引起全世界范圍內(nèi)的科學(xué)工作者及管理部門的高度重視。本學(xué)位論文采用玻片浸漬法測(cè)定了柑橘全爪螨田間種群對(duì)常用殺螨劑的敏感性，比較研究了取食不同柑橘種質(zhì)資源的柑橘全爪螨對(duì)殺螨劑的敏感性差異，同時(shí)測(cè)定了磷酸三苯酯(TPP)、順丁烯二酸二乙酯(DEM)和增效醚(PBO)3種增效劑對(duì)殺螨劑的增效作用，研究的目的旨在掌握柑橘全爪螨對(duì)殺螨劑

2、的抗藥性水平及其抗藥性形成的生理生化機(jī)制，為柑橘全爪螨的抗藥性治理提供依據(jù)。此外，利用RT-PCR和RACE技術(shù)克隆獲得了柑橘全爪螨細(xì)胞色素P450基因cDNA全長(zhǎng)和片段各1條，為進(jìn)一步研究P450基因介導(dǎo)柑橘全爪螨抗藥性的分子機(jī)制提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　 ㈠柑橘全爪螨田間種群對(duì)常用殺螨劑的敏感性監(jiān)測(cè)：⑴柑橘全爪螨對(duì)4種殺螨劑的敏感性監(jiān)測(cè)。2008-2009年兩年敏感性監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，柑橘全爪螨對(duì)供試的4種殺螨劑中

3、的甲氰菊酯(菊酯類農(nóng)藥)敏感性下降最快，LC50值在兩年間分別為4.93 mg·L-1和25.17 mg·L-1，相對(duì)抗性達(dá)5.1倍；其次是噠螨酮(雜環(huán)類農(nóng)藥)，LC50值分別為3.78 mg·L-1和8.38 mg·L-1，相對(duì)抗性達(dá)2.2倍；柑橘全爪螨對(duì)阿維菌素(生物源類農(nóng)藥)的敏感性基本維持不變；而對(duì)甲維鹽(半合成抗生素類農(nóng)藥)的敏感性卻有所上升，2009年柑橘全爪螨對(duì)甲維鹽的相對(duì)敏感性是2008年的1.4倍。⑵取食不同柑橘種質(zhì)資

4、源的柑橘全爪螨對(duì)常用殺螨劑的敏感性測(cè)定。采自不同柑橘種質(zhì)資源上的柑橘全爪螨對(duì)甲氰菊酯和噠螨酮均存在一定的敏感性差異。柑橘全爪螨不同食物種群對(duì)甲氰菊酯的敏感性由高到低依次為柚、橘和枳殼，其中枳殼種群對(duì)甲氰菊酯的相對(duì)抗性是柚種群的2.34倍；對(duì)噠螨酮的敏感性由高到低依次為柚、枳殼和橘種群，其中橘種群對(duì)噠螨酮的相對(duì)抗性是柚種群的3.92倍；而取食柑橘不同種質(zhì)資源的柑橘全爪螨對(duì)阿維菌素的敏感性并無(wú)顯著差異。
　　 ㈡三種增效劑對(duì)常用殺螨

5、劑的增效作用。增效劑增效作用測(cè)定結(jié)果表明，TPP對(duì)甲氰菊酯、阿維菌素和甲維鹽有顯著的增效作用，增效倍數(shù)分別為3.2倍、2.0倍和3.8倍。DEM對(duì)噠螨酮和甲維鹽具有顯著的增效作用，增效倍數(shù)分別為3.3倍和2.6倍。PBO對(duì)甲氰菊酯、噠螨酮和甲維鹽有顯著的增效作用，增效倍數(shù)分別為2.7倍、2.4倍和7.2倍。PBO對(duì)阿維菌素有一定的增效效果，其增效倍數(shù)為1.7倍。而TPP對(duì)噠螨酮以及DEM對(duì)甲氰菊酯和阿維菌素均無(wú)增效作用。
　　

6、㈢柑橘全爪螨細(xì)胞色素P450基因的克隆。利用RT-PCR，克隆獲得了2條柑橘全爪螨P450基因片段N1和N2，GenBank登錄號(hào)分別為FJ480403和FJ480404。通過(guò)RACE技術(shù)，克隆得到了N2的全長(zhǎng)序列，該全長(zhǎng)基因被命名為CYP4CF1，其序列全長(zhǎng)1880 bp，包括1527 bp編碼508個(gè)氨基酸的開放閱讀框，87 bp的5'端非編碼區(qū)長(zhǎng)，286 bp的3'端非編碼區(qū)，起始密碼子ATG，終止密碼子TAA。在其核酸序列3'末