棉鈴蟲細(xì)胞色素P450基因的克隆與功能表達(dá).pdf

1、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文棉鈴蟲細(xì)胞色素P450基因的克隆與功能表達(dá)姓名：岳麗娜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治指導(dǎo)教師：吳益東20060901楠鈴蟲細(xì)胞色素P 4 5 0 基因的克隆與功能表達(dá)菊酯的抗性約為3 5 0 倍) 中的表達(dá)量．在抗性品系Y S ．F P 中腸中C Y P 6 A E l 2 有3 ．6 倍的過(guò)量表達(dá)，c Y P g A l 2 有1 3 3 倍的過(guò)量表達(dá)，其他基因無(wú)過(guò)量表達(dá)( 相對(duì)于Y S 品系) ．

2、在Y S ．F P 脂肪體中，C Y P 6 A E l 2 ．C Y P 9 A 1 2 ．c Y P g A l 4 和C Y P g A l 7 v 2 分別有1 ．3 、8 1 ．4 、2 和3 ．3 倍的過(guò)量表達(dá)，其他基因未發(fā)現(xiàn)過(guò)量表達(dá)( 相對(duì)于Y S 品系) ．在Y S - F M 品系中，6 個(gè)基因都沒(méi)有過(guò)量表達(dá)．因此，C Y P 6 A E l 2 ，C Y P 9 A 1 2 ，c Y P g A l 4 和c Y P

3、 g A l 7 v 2的過(guò)量表達(dá)可能參與了棉鈴蟲Y S ．F P 品系對(duì)擬除蟲菊酯抗性的形成．從各個(gè)基因在不同組織的表達(dá)水平來(lái)看，C Y P 9 A 1 4 、c Y P g A l 7 v 2 和C Y P 9 A 1 8 在中腸中的表達(dá)量較高，而C Y P 6 A 1 2 ，C Y P 6 8 7 和C Y P g A l 2 在脂肪體中的表達(dá)量較高．三、棉鈴蟲細(xì)胞色素P 4 5 0 基因的功能表達(dá)細(xì)胞色素P 4 5 0 基因的過(guò)

4、量表達(dá)是棉鈴蟲對(duì)氰戊菊酯產(chǎn)生抗性的主要抗性機(jī)理．本研究以p Y E S 2 作為表達(dá)載體，在釀酒酵母w ( R ) 菌株中表達(dá)了C Y P 9 A 1 2 ，c Y P g A l 4和C Y P 9 A 1 7 v 2 基因，分析了這三個(gè)基因的異源表達(dá)產(chǎn)物對(duì)模式底物的氧化代謝作用( P N O D ，E C O D ，M C O D 和M R O D ) 及對(duì)順式氰戊菊酯的離體代謝作用．結(jié)果表明含C Y P g A l 2 、c Y

5、P g A l 4 和C Y P 9 A 1 7 v 2 基因的重組酵母細(xì)胞提取液的M R O D 活性分別是2 ．9 8 、5 ．4 1 ，和2 ．8 0 p m o lr e s o r u f i n ／m i n ／m g p r o t e i n ，P N O D 活性分別為O ．5 9 、0 ．4 2和0 ．4 7 n m o l p —n i t r o p h e n o l ／m i n ／m gp r o t e

6、i n ；而均檢測(cè)不到M C O D 和E C O D 活性．離體代謝順式氰戊菊酯實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明含有C Y P 9 A 1 2 ．C Y P 9 A 1 4 和c Y P g A l 7 v 2 外源基因的重組酵母細(xì)胞提取液對(duì)順式氰戊菊酯具有代謝作用，代謝率分別為8 ．1 8 、4 ．2 9 和1 ．7 1p m o le s f e n v a l e r a t e ／m i n ／m gp r o t e i n ．該結(jié)果充分證實(shí)了