二斑葉螨抗藥性監(jiān)測(cè)及分子檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、二斑葉螨（Tetranychus urticae Koch）是危害農(nóng)作物的重要害螨，寄主植物廣泛，包括蔬菜、果樹(shù)、棉花以及觀賞作物等，其主要通過(guò)成若螨聚集植物葉片背部取食葉片汁液，破壞植物細(xì)胞，吐絲結(jié)網(wǎng)最后造成植株發(fā)黃葉片凋落甚至死亡，給農(nóng)作物帶來(lái)了嚴(yán)重危害。二斑葉螨對(duì)化學(xué)藥劑的抗藥性發(fā)展很快，目前已對(duì)多種不同種類的殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生了不同程度的抗藥性，不同地理種群的抗藥性現(xiàn)狀不明確阻礙了對(duì)該螨的科學(xué)合理防控。本研究中，首先建立了葉螨生物測(cè)定新

2、方法—藥管葉膜法，監(jiān)測(cè)明確了不同地區(qū)二斑葉螨種群對(duì)10種殺蟲(chóng)殺螨劑的抗性水平，然后檢測(cè)了不同種群中對(duì)阿維菌素、聯(lián)苯菊酯抗藥性相關(guān)基因的突變頻率，最后克隆獲得了二斑葉螨谷氨酸氯離子通道（GluCl）基因、γ-氨基丁酸受體（GABAR1和GABAR2）基因的全長(zhǎng)序列，研究明確抗性基因在室內(nèi)相對(duì)敏感種群和田間種群中的相對(duì)表達(dá)量差異，分析其與二斑葉螨抗藥性的相關(guān)性。研究結(jié)果為二斑葉螨的科學(xué)的化學(xué)防控具有重要指導(dǎo)意義。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:

3、r>　　一、二斑葉螨生測(cè)方法的改良及對(duì)田間種群的抗藥性監(jiān)測(cè)
　　本研究改良了一種新的葉螨生物測(cè)定方法—藥管浸葉法（簡(jiǎn)稱VLD），即采用2 mL的離心管和直徑為1 cm的寄主葉片同時(shí)浸藥再飼喂葉螨的方法，可充分發(fā)揮其藥劑的觸殺和胃毒活性，測(cè)定方法操作簡(jiǎn)單而且重復(fù)性高。分別采用傳統(tǒng)的玻片浸漬法（簡(jiǎn)稱SD）與藥管浸葉法測(cè)定5種殺蟲(chóng)殺螨劑對(duì)室內(nèi)截形葉螨（T. truncatus）種群的毒力，結(jié)果表明，與玻片浸漬法相比，采用藥管浸葉法測(cè)定截

4、形葉螨對(duì)藥劑表現(xiàn)更為敏感，毒力測(cè)定的結(jié)果更低。之后采用VLD方法監(jiān)測(cè)了不同二斑葉螨田間種群雌成螨對(duì)10種殺蟲(chóng)殺螨劑的抗性水平，結(jié)果表明不同種群對(duì)藥劑的敏感度不一樣，六個(gè)田間種群均對(duì)阿維菌素產(chǎn)生了極高的或中高等水平的抗性；乙基多殺菌素對(duì)二斑葉螨各種群毒力較高；除了山西運(yùn)城種群對(duì)聯(lián)苯肼酯產(chǎn)生了中等水平的抗性外，其他種群對(duì)聯(lián)苯肼酯均表現(xiàn)為敏感度下降或者低等水平抗性。
　　二、二斑葉螨對(duì)聯(lián)苯菊酯和阿維菌素抗性的快速分子檢測(cè)技術(shù)
　　

5、克隆獲得了二斑葉螨鈉離子通道III S6基因以及GluCl基因片段，基于該片段中包含的抗性和敏感種群中的點(diǎn)突變位點(diǎn)成功建立了二斑葉螨對(duì)聯(lián)苯菊酯和阿維菌素的等位基因特異性PCR（PASA）技術(shù)，PASA檢測(cè)結(jié)果表明，二斑葉螨室內(nèi)相對(duì)敏感種群中均存在雜合子個(gè)體，F(xiàn)1538I點(diǎn)突變頻率為10.0％，G323D點(diǎn)突變頻率為1.67%；而北京通縣和海南三亞種群中F1538I點(diǎn)突變頻率則分別達(dá)50.0%和53.3%，北京密云種群的G323D點(diǎn)突變頻

6、率高達(dá)91.7%；線性分析結(jié)果表明，二斑葉螨不同種群抗性倍數(shù)與F1538I點(diǎn)突變頻率相關(guān)性不顯著，而抗性倍數(shù)與G323D點(diǎn)突變頻率之間呈顯著的正相關(guān)。
　　三、二斑葉螨敏感和抗性種群中抗阿維菌素抗性相關(guān)基因mRNA的表達(dá)
　　在測(cè)定了室內(nèi)相對(duì)敏感種群和田間種群對(duì)阿維菌素抗藥性的基礎(chǔ)上，比較了這兩個(gè)種群中抗阿維菌素可能相關(guān)的受體基因GluCl和GABAR基因的表達(dá)量差異，結(jié)果表明，田間二斑葉螨抗性種群中，GluCl和GABAR