鴨疫里氏桿菌的分子診斷及抗藥性研究.pdf

1、鴨疫里氏桿菌(Riemerella anatipestifer，RA)是鴨傳染性漿膜炎的病原菌，主要侵染2～8周齡雛鴨，對(duì)養(yǎng)鴨業(yè)危害十分嚴(yán)重。RA有21個(gè)血清型，各血清型之間缺乏交叉保護(hù)能力。目前，對(duì)RA的防控主要依靠抗生素，但RA對(duì)抗生素易產(chǎn)生耐藥性，臨床防治效果不佳。對(duì)RA的診斷主要依靠血清學(xué)診斷，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。鑒于此，本論文建立了用分子生物學(xué)技術(shù)快速確診RA的方法，并采用紙片擴(kuò)散法檢測(cè)RA對(duì)抗菌藥物的敏感性，旨在為快速診斷和臨床防治R

2、A病提供科學(xué)依據(jù)。
　　 經(jīng)對(duì)浙江省臨安市橫畈麻鴨養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)病雛鴨致病菌進(jìn)行分離培養(yǎng)、生理生化鑒定，獲得14株符合RA生物學(xué)特性的分離株?；赗A的16S rRNA基因保守序列設(shè)計(jì)引物，建立PCR法對(duì)RA進(jìn)行診斷。結(jié)果6株標(biāo)準(zhǔn)株RA、14株臨床分離疑似RA能擴(kuò)增出698 bp的特異性條帶，而鴨大腸桿菌(Escherichia coli)和鴨沙門氏菌(Salmonella)未能擴(kuò)增出特異性條帶。測(cè)序結(jié)果分析顯示，與NCBI上RA菌株

3、相應(yīng)片段相似性達(dá)99.9％。利用這對(duì)引物以RA不同稀釋度菌液為模板進(jìn)行PCR敏感度檢測(cè)，最小檢出量為2.3×103 CFU/mL。
　　 用該法對(duì)鴨場(chǎng)隨機(jī)送檢的10只病死鴨組織（肝臟、腦、心血、脾、腸、肌肉）的診斷研究發(fā)現(xiàn):腦組織中RA檢出率最高，其次為心血、肝臟和脾，腸和肌肉未檢出。PCR法的檢出率為90％，細(xì)菌分離鑒定檢出率為70％， PCR法檢出率比細(xì)菌分離鑒定檢出率高20％。研究結(jié)果表明:基于16S rRNA基因序列的P

4、CR檢測(cè)方法在RA診斷中具有特異、靈敏和快速的優(yōu)點(diǎn)。
　　 使用9種常用抗生素和中藥黃連湯（由黃連、黃柏、甘草組成的復(fù)方湯劑），以紙片擴(kuò)散法對(duì)RA進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)RA對(duì)黃連湯、諾氟沙星和氯霉素高度敏感，其敏感度相對(duì)應(yīng)的為100％、95％和90％;對(duì)頭孢拉定、新霉素和四環(huán)素中度敏感，中度敏感率分別為90％、85％和80％;對(duì)卡那霉素、鏈霉素、慶大霉素、氨芐西林耐藥性很強(qiáng)，其耐藥率相應(yīng)為100％、85％、80％和65％。建議臨床防