一個(gè)新的煙草糖基轉(zhuǎn)移酶基因sm-Ngt1在轉(zhuǎn)基因煙草中的功能研究.pdf

1、糖基轉(zhuǎn)移酶(Glycosyltransferases,GTs)是一種催化糖基與特異受體分子結(jié)合，形成糖苷鍵的酶。糖基轉(zhuǎn)移酶催化的糖基化在植物信號(hào)識(shí)別、物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和次級(jí)代謝過程中起著重要的作用。
　　 本實(shí)驗(yàn)室以煙草為材料，克隆了一個(gè)新的受甲基茉莉酸(MeJA)和水楊酸(SA)雙重誘導(dǎo)表達(dá)的糖基轉(zhuǎn)移酶基因sm-Ngt1?；趐CAMBIA1302和pCAMBIA1301載體，本實(shí)驗(yàn)室前期研究分別構(gòu)建了sm-Ngt1基因與綠色熒光蛋白

2、(GFP)基因融合的植物表達(dá)載體pGT-GFP，以及5個(gè)不同的5’端缺失的sm-Ngt1基因啟動(dòng)子片段與GUS報(bào)告基因融合的植物表達(dá)載體pGTPA、pGTPB、pGTPC、pGTPD和pGTPE，并且采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得了轉(zhuǎn)基因煙草植株及其后代。本研究分析了這些融合基因在轉(zhuǎn)基因煙草后代植株中的表達(dá)和定位。研究結(jié)果如下：
　　 1、組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，gus基因在pGTPA、pGTPB、pGTPC和pGTPD轉(zhuǎn)基因

3、植株后代的根，葉和花中都有表達(dá)，其中，在pGTPC和pGTPD轉(zhuǎn)基因植株后代中強(qiáng)表達(dá)，而在pGTPE轉(zhuǎn)基因植株中表達(dá)量較低。
　　 2、T1代轉(zhuǎn)基因植株中，GUS酶活性與T0代轉(zhuǎn)基因植株中的酶活測(cè)定結(jié)果一致，進(jìn)一步證明在啟動(dòng)子序列的-800～-524bp間存在MeJA和SA的誘導(dǎo)元件，而在-524～-220bp間存在超表達(dá)元件。pGTPC和pGTPD啟動(dòng)子片段轉(zhuǎn)基因煙草植株中，gus基因的組成型表達(dá)量遠(yuǎn)超過CaMV35S啟動(dòng)子的

4、轉(zhuǎn)基因植株。
　　 3、在sm-Ngt1基因超表達(dá)的T1代轉(zhuǎn)基因煙草植株中，出現(xiàn)了一些變異表型，如植株矮化，莖增粗，葉脈排列不規(guī)則、增粗，葉上表皮氣孔少而大，腺毛粗、分叉。通過一系列的石蠟切片觀察發(fā)現(xiàn)，在sm-Ngt1超表達(dá)的T1代轉(zhuǎn)基因植株中，葉和莖的木質(zhì)部導(dǎo)管數(shù)量、薄壁細(xì)胞長(zhǎng)度和莖維管束長(zhǎng)度明顯與W38野生型植株對(duì)照不一樣。
　　 4、對(duì)pGT-GFP載體T1代轉(zhuǎn)基因煙草植株的組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，GT-GFP融合蛋