大腸桿菌O114基因簇中β1-3半乳糖基轉(zhuǎn)移酶基因wbuP的功能表征.pdf

1、O-抗原位于細(xì)菌表面，是位于革蘭氏陰性菌表面的脂多糖的重要組成部分，由多個(gè)寡糖單位組成，由于長期受到來自宿主的選擇壓力，具有非常豐富的多樣性。其中的基因可以被分為三類:單糖合成酶基因、糖基轉(zhuǎn)移酶基因和寡糖單位處理酶基因。其中，大部分的糖基轉(zhuǎn)移酶(GTs)的功能沒有被鑒定和表征。本文利用生物化學(xué)方法表征了兩種大腸桿菌O-抗原基因簇中編碼的糖基轉(zhuǎn)移酶的功能。
　　在實(shí)驗(yàn)室通過生物信息學(xué)預(yù)測大腸桿菌O114基因簇中wbuP基因編碼半乳糖

2、基轉(zhuǎn)移酶的基礎(chǔ)之上，本研究首先構(gòu)建含有目的酶基因片段的克隆表達(dá)載體，再對(duì)WbuP融合蛋白誘導(dǎo)表達(dá)后，用含有WbuP的細(xì)胞粗提液與供體底物UDP-Gal和受體底物GlcNAca-PP-(CH2)11-PhU進(jìn)行酶活反應(yīng)，進(jìn)而利用一級(jí)質(zhì)譜與二級(jí)質(zhì)譜、特異性糖苷外切酶與質(zhì)譜結(jié)合的方法對(duì)酶活產(chǎn)物、催化產(chǎn)物的連接順序與異頭碳的構(gòu)型進(jìn)行了定性分析;對(duì)影響酶活反應(yīng)的各因素（反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、pH值、離子、離子去垢劑等）進(jìn)行了定量分析;最后通過對(duì)酶活