β1，4半乳糖基轉(zhuǎn)移酶Ⅰ和Ⅴ在腫瘤和凋亡中的作用研究.pdf

1、蛋白的糖基化修飾是一個生物體內(nèi)復(fù)雜而又重要的過程，它和腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。蛋白質(zhì)的糖基化修飾是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體內(nèi)由糖基轉(zhuǎn)移酶參與下完成的。β1,4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶(β1,4-galactosyl transferase)(簡稱β1，4GT)家族包括β1，4GI、I到β1，4GT Ⅶ共7個成員，能定位于高爾基體催化Galβ1→4G1cNAC糖苷鍵形成，參與糖復(fù)合物的合成。β1,4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶Ⅰ(簡稱β1，4GT Ⅰ

2、)是最早被克隆的一種糖基轉(zhuǎn)移酶。β1，4GT Ⅰ既能定位于高爾基體催化Galβ1→4G1cNAC糖苷鍵形成，參與糖復(fù)合物的合成；又能定位于細(xì)胞表面，作為一種細(xì)胞粘附分子參與細(xì)胞與基質(zhì)之間和細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互作用。 我們的研究發(fā)現(xiàn)：myr-Akt通過下調(diào)β1，4GT Ⅰ的表達(dá)從而抑制CHX介導(dǎo)的SMMC-7721細(xì)胞的凋亡。而渥曼青霉素和LY294002處理可以增加Spl的轉(zhuǎn)錄表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)β1，4GT Ⅰ的表達(dá)，從而增強(qiáng)了CHX

3、所介導(dǎo)的SMMC-7721細(xì)胞凋亡。另外，我們發(fā)現(xiàn)CHX下調(diào)Akt蛋白表達(dá)從而導(dǎo)致β1，4GT Ⅰ的表達(dá)上調(diào)來增加SMMC-7721細(xì)胞的凋亡。 我們另一個部分的研究結(jié)果表明：β1，4GT Ⅰ在肝癌組織和肝癌細(xì)胞中高表達(dá)。β1，4GT Ⅰ的表達(dá)受肝癌相關(guān)因素黃曲霉素、佛波酯、乙肝病毒HBX蛋白和p53蛋白調(diào)控，并且β1，4GT Ⅰ的表達(dá)和肝癌細(xì)胞的成瘤能力、侵襲、轉(zhuǎn)移以及侵襲相關(guān)的Integrin β1的表達(dá)和FAK的磷酸化相關(guān)

4、。報告基因和凝膠阻滯試驗(yàn)證實(shí)：E2F1調(diào)控β1，4GT Ⅰ轉(zhuǎn)錄而調(diào)節(jié)其在肝癌中的生物學(xué)功能。 β1，4GI Ⅴ負(fù)責(zé)合成膠質(zhì)瘤特征的N-連接型糖鏈末端GlcNAc β1，6Man的半乳糖基化修飾。國外研究發(fā)現(xiàn)，β1，4GT Ⅴ在多種腫瘤細(xì)胞中受Spl調(diào)控。我們的研究發(fā)現(xiàn)，β1，4GT Ⅴ在膠質(zhì)瘤表達(dá)增高并和膠質(zhì)瘤的分型相關(guān)。過表達(dá)β1，4GTⅤ可促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化星型膠質(zhì)細(xì)胞的侵襲和生存。抑制其表達(dá)可促進(jìn)凋亡、抑制遷移侵襲以及在

5、裸鼠體內(nèi)的成瘤能力和抑制AKI、的磷酸化活性。另外，其啟動子活性可被生長因子EGF、激活型Ras、ERK1、JNK1和激活型AKT激活。鬼臼乙叉甙(VP16)，是植物產(chǎn)物鬼臼毒素的一種半合成派生物，它可以對許多人類新生物產(chǎn)生臨床作用，用于小細(xì)胞肺癌、惡性淋巴癌、卵巢癌、睪丸腫瘤、胃癌和膠質(zhì)瘤的治療。我們發(fā)現(xiàn)：抑制β1，4GI、Ⅴ的表達(dá)促進(jìn)VP16誘導(dǎo)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡。過表達(dá)β1，4GT Ⅴ抑制VP16誘導(dǎo)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡。VP16可通過

6、抑制Spl的表達(dá)下調(diào)β1，4GT Ⅴ的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄。從上可見，β1，4GT Ⅴ可促進(jìn)膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展并且可能可作為膠質(zhì)瘤治療新的靶向。β1，4GT Ⅴ在膠質(zhì)瘤組織、細(xì)胞高表達(dá)并受EGF/Ras/ERK信號通路調(diào)控。我們的研究證實(shí)：E1AF調(diào)控β1，4GT Ⅴ在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄和介導(dǎo)EGF/Ras/ERK信號通路對β1，4GT Ⅴ的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。過表達(dá)E1AF促進(jìn)β1，4GT Ⅴ的轉(zhuǎn)錄表達(dá)和膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲。抑制E1AF的表達(dá)抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的