刺參(Apostichopusjaponicus)腸道益生菌的應(yīng)用研究.pdf

1、益生菌作為一種高效安全的疾病防治途徑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中得到廣泛的應(yīng)用。本研究對(duì)分離自刺參腸道的3株弧菌拮抗菌進(jìn)行分類(lèi)鑒定和安全性檢驗(yàn),篩選出2株安全的刺參潛在益生菌。通過(guò)稚參期刺參養(yǎng)殖中潛在益生菌的應(yīng)用效果研究初步驗(yàn)證了潛在益生菌的益生效果。比較研究了不同形式不同濃度的益生菌對(duì)刺參生長(zhǎng)、免疫和抗病力的影響,對(duì)益生菌的最佳使用方式和作用機(jī)理進(jìn)行了探討,為刺參腸道益生菌在刺參養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。
　　 首先采用16SrDNA序列分

2、析法將3株弧菌拮抗菌分別鑒定為Bacillussp.(GSC-1)、Bacillussp.(GSC-2)和EnterococcusSp.(GSC-3),然后結(jié)合菌株對(duì)10大類(lèi)17種常用抗生素的藥敏性和對(duì)稚參期刺參的毒害性評(píng)價(jià)了3株弧菌拮抗菌的安全性。藥敏性檢測(cè)結(jié)果顯示3株拮抗菌均對(duì)50％以上常用抗生素敏感。分別以103、105或107CFU/ml的GSC-1、GSC-2、GSC-3或燦爛弧菌浸浴稚參以檢驗(yàn)拮抗菌對(duì)稚參期刺參的安全性,7d

3、后各弧菌拮抗菌浸浴組的稚參成活率均高于同濃度的燦爛弧菌處理組;GSC-1和GSC-3在實(shí)驗(yàn)濃度下對(duì)稚參成活率無(wú)顯著影響(P＞0.05),可作為稚參的潛在益生菌;107CFU/mlGSC-2浸浴組稚參的成活率顯著低于對(duì)照組(P＜0.05),因此GSC-2不適合作為稚參的潛在益生菌。
　　 通過(guò)研究潛在益生菌株GSC-1和GSC-3對(duì)稚參期刺參生長(zhǎng)、免疫和抗病力的影響,初步探討了GSC-1和GSC-3的益生效果。將潛在益生菌GSC-

4、1和GSC-3以109CFU/g的比例與鼠尾藻粉混合后飼養(yǎng)稚參20d,潛在益生菌處理組的稚參成活率、特定生長(zhǎng)率和變色率均高于對(duì)照組,其中GSC-1處理組稚參的成活率和變色率顯著提高(P＜0.05),而GSC-3處理組稚參的成活率和特定生長(zhǎng)率顯著提高(P＜0.05);與對(duì)照組相比,潛在益生菌GSC-1和GSC-3均有效增加了稚參的總菌數(shù)(P＜0.05),GSC-1還有效降低了稚參的弧菌數(shù)(P＜0.05);潛在益生菌GSC-1和GSC-3均

5、可顯著提高稚參體組織中的酚氧化酶和溶菌酶活力(P＜0.05),GSC-1亦顯著提高了其酸性磷酸酶和超氧化物歧化酶活力(P＜0.05);GSC-1和GSC-3處理組稚參的抗?fàn)N爛弧菌感染能力均高于對(duì)照組,其中GSC-3顯著降低了燦爛弧菌攻毒后稚參的死亡率(P＜0.05)。研究結(jié)果表明,潛在益生菌GSC-1和GSC-3能夠促進(jìn)稚參的健康生長(zhǎng)并提高其抗病能力,因而GSC-1和GSC-3均可作為益生菌應(yīng)用于稚參養(yǎng)殖中。
　　 本論文分別對(duì)

6、益生菌GSC-1和GSC-3的作用機(jī)理和最佳使用方式進(jìn)行了研究探討。以初始體重為(4.120±0.120)g的刺參為研究對(duì)象,在室內(nèi)循環(huán)水系統(tǒng)中進(jìn)行8周的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn),研究在基礎(chǔ)飼料中分別添加不同劑量(107CFU/g或109CFU/g)和不同形式(活菌或熱滅活菌)的芽孢桿菌屬益生菌GSC-1對(duì)刺參特定生長(zhǎng)率、腸道菌群、免疫力及抗病力的影響,以期尋找益生菌GSC-1的最佳使用方式并探討其作用機(jī)理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:飼料中添加109CFU/g的益

7、生菌GSC-1可以顯著提高刺參的特定生長(zhǎng)率(P＜0.05),而飼料中107CFU/g活菌或滅活菌的添加對(duì)刺參特定生長(zhǎng)率均無(wú)顯著影響(P＞0.05);益生菌GSC-1以活菌形式添加在飼料中不僅顯著增加了刺參腸道總菌數(shù)(P＜0.05),而且顯著減少了刺參腸道弧菌數(shù)(P＜0.05),滅活菌的添加對(duì)刺參腸道總菌數(shù)和弧菌數(shù)影響均不顯著(P＞0.05);與對(duì)照組相比,飼料中益生菌GSC-1的添加激活了刺參的免疫系統(tǒng),其中刺參體腔細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活性和

8、吞噬活性以及體腔細(xì)胞破碎液上清中的酸性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性均以109CFU/g活菌組最高;益生菌GSC-1可以提高刺參抵抗?fàn)N爛弧菌感染的能力,活菌添加組的刺參發(fā)病率顯著降低(P＜0.05),其中109CFU/g活菌添加組的發(fā)病率最低。上述結(jié)果表明,益生菌GSC-1可以改善刺參的腸道微生態(tài)環(huán)境并提高其免疫力,并以此促進(jìn)刺參的生長(zhǎng)和抗病力。本實(shí)驗(yàn)條件下,益生菌GSC-1以109CFU/g活菌形式添加在飼料中效果最佳。
　　 以

9、初始體重為(4.094±0.057)g的刺參為研究對(duì)象,在室內(nèi)循環(huán)水系統(tǒng)中進(jìn)行8周的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn),研究在基礎(chǔ)飼料中分別添加不同劑量(107CFU/g或109CFU/g)和不同形式(活菌或熱滅活菌)的益生菌GSC-3對(duì)刺參特定生長(zhǎng)率、腸道菌群、免疫酶活力及抗病力的影響,以期尋找益生菌GSC-3的最佳添加形式和添加劑量,并探討其作用機(jī)理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:飼料中添加益生菌GSC-3可以提高刺參的特定生長(zhǎng)率,109CFU/g活菌和滅活菌添加組的刺參特

10、定生長(zhǎng)率顯著升高(P＜0.05);益生菌GSC-3影響了刺參腸道微生態(tài)環(huán)境,活菌形式的添加不僅顯著增加了刺參腸道總菌數(shù)(P＜0.05),而且顯著減少了刺參腸道弧菌數(shù)(P＜0.05),滅活形式益生菌GSC-3的添加僅顯著增加了刺參腸道總菌數(shù)(P＜0.05);飼料中益生菌GSC-3的添加激活了刺參的免疫系統(tǒng),109CFU/g滅活菌添加組刺參的體腔細(xì)胞密度、呼吸爆發(fā)活性、吞噬活性以及體腔細(xì)胞破碎液上清中的酚氧化酶、酸性磷酸酶和超氧化物歧化酶活

11、性在各處理組中最高;益生菌GSC-3提高了刺參抵抗?fàn)N爛弧菌感染的能力,滅活菌添加組和109CFU/g活菌添加組的發(fā)病率顯著降低(P＜0.05),107CFU/g滅活菌添加組的發(fā)病率最低,但與109CFU/g滅活菌添加組差異不顯著。上述結(jié)果表明,滅活益生菌GSC-3雖然不能有效降低刺參腸道弧菌數(shù)目,卻可以與活菌添加組同樣程度地促進(jìn)刺參生長(zhǎng),并且可以比活菌添加組更好地激活刺參的免疫系統(tǒng),提高刺參抵抗?fàn)N爛弧菌感染的能力,還可以消除未滅活腸球菌