中韓刺參(Apostichopusjaponicus)雜交與自交子一代抗逆性比較及其甲基化分析.pdf

1、針對(duì)目前刺參（Apostichopus japonicus）養(yǎng)殖中存在的刺參種質(zhì)退化、抗逆性下降等問題，本研究以刺參中國(guó)群體及引進(jìn)的韓國(guó)群體作為育種材料，采用完全雙列雜交法進(jìn)行種內(nèi)群體間雜交以及群體內(nèi)自繁，獲得了自交和雜交子一代，比較了中韓雜交與自交刺參對(duì)高溫和鹽度的耐受性，以及對(duì)干露脅迫的免疫應(yīng)答的異同，最后分析了自交和雜交子一代基因組DNA甲基化水平。主要研究結(jié)果如下：
　　一、中韓刺參雜交與自交子一代高溫與鹽度耐受性比較

2、r>　　刺參中國(guó)養(yǎng)殖群體（C）和韓國(guó)野生群體（K）進(jìn)行完全地雙列雜交，得到四個(gè)交配組合C（♀）×C（♂）（CC）、K（♀）×K（♂）（KK）、K（♀）×C（♂）(KC)和C（♀）×K（♂）(CK)。各交配組合的子一代刺參在16℃，鹽度為30‰的海水中暫養(yǎng)一周，然后轉(zhuǎn)移到鹽度或溫度按以下四種方式改變的實(shí)驗(yàn)海水中：1）實(shí)驗(yàn)海水鹽度以2‰/h的速率上升或者下降，2）刺參被迅速轉(zhuǎn)移到梯度的高鹽度（36,38,40,42,44‰）或者低鹽度（21

3、,19,17,15,13,11‰）的海水中，3）實(shí)驗(yàn)海水溫度以1℃/h的速率上升，4）刺參被轉(zhuǎn)移到梯度的高溫海水（27,28,29,30,31℃）中。統(tǒng)計(jì)單個(gè)實(shí)驗(yàn)中刺參的存活率。結(jié)果表明，溫度突變時(shí)，兩雜交組的半數(shù)致死高溫ULT50（upper lethal temperature50）高于韓國(guó)自交組，但是低于中國(guó)自交組（P<0.05）。溫度漸升時(shí)C（♀）×K（♂）組半數(shù)致死高溫50％UST高于其它三組刺參。對(duì)于鹽度突變時(shí)的半數(shù)致死高鹽

4、ULS50(upper lethal salinity50），兩雜交組顯著高于韓國(guó)自交組（P<0.05）。鹽度漸變時(shí)，C（♀）×K（♂）刺參的半數(shù)致死高鹽50%USS（upper survival salinity）顯著高于韓國(guó)自交組刺參。鹽度突降或者漸降時(shí)，K（♀）×C（♂）刺參的半數(shù)致死低鹽LLS50（lower lethal salinity50）和50%LSS都是最低的，與韓國(guó)自交組有顯著的差異。實(shí)驗(yàn)說明，中韓雜交刺參在溫度和鹽

5、度耐受性方面有一定的雜種優(yōu)勢(shì)，意味著通過雜交育種，刺參的抗逆性能得到有效的改善。
　　二、中韓刺參雜交和自交子一代對(duì)干露脅迫的非特異性免疫應(yīng)答比較
　　研究了干露脅迫對(duì)中韓刺參自交和雜交子一代的非特異性免疫指標(biāo)的影響。結(jié)果表明，四組刺參的體腔液細(xì)胞的初始吞噬活性為CK>KC>CC>KK，但沒有顯著性差異，脅迫后四組刺參吞噬活性顯著地降低。脅迫開始前兩雜交組刺參CK，KC的CAT活性和SOD活性顯著高于自交組刺參CC，KK。脅

6、迫開始后四種刺參的過氧化氫酶CAT活性和超氧化物歧化酶SOD活性顯著升高。經(jīng)過1h干露脅迫后，CK、KC組刺參的CAT活性分別高于自交租平均值27.49%，SOD活性分別高于自交租平均值7.78%，10.56%。脅迫開始后四組刺參的溶菌酶LZM活性顯著下降，四種刺參的LZM活性變化沒有顯著性差異。因此，通過雜交育種技術(shù)改善刺參的免疫性能是可行的。
　　三、中韓刺參自交和雜交子一代間甲基化對(duì)比分析
　　運(yùn)用甲基化敏感多態(tài)性(m