楊梅葉原花色素的研究.pdf

1、原花色素(Proanthocyanidins)是廣泛存在于植物中的具有C6·C3·C6基本構(gòu)架的多酚類物質(zhì)，其中原花青素型原花色素分布最為廣泛。大量研究結(jié)果表明原花色素具有抗氧化、抗菌、抗癌以及預(yù)防和治療心血管疾病等活性功能。楊梅(Myrica rubra Sieb.et Zucc.)是我國(guó)南方特產(chǎn)水果，目前有關(guān)楊梅的研究利用主要以楊梅果實(shí)為主。楊梅樹枝繁葉茂，四季常青，每年修剪下來的楊梅葉常被當(dāng)做廢棄物而丟棄。已有研究表明楊梅葉中富含

2、酚類物質(zhì)，具有抗氧化、抗菌抗病毒等生物活性，是一種具有開發(fā)潛力的植物資源。
　　 本文主要以楊梅葉為研究對(duì)象，從中提取分離原花色素，進(jìn)而對(duì)其結(jié)構(gòu)組成進(jìn)行了鑒定。在此基礎(chǔ)之上分析了它的抗氧化和抗癌活性及機(jī)理，評(píng)價(jià)了它的食用安全性，主要的研究結(jié)果如下：
　　 以荸薺種楊梅葉為原料，采用Sephadex LH-20等分離方法分璃純化楊梅葉原花色素，采用光譜分析、酸催化降解、HPLC-MS及NMR等方法分析了原花色素的結(jié)構(gòu)組成。

3、結(jié)果顯示楊梅葉可提取(EPAs)及不可提取原花色素(UEPAs)均為原飛燕草素，可提取原花色素的末端單元只含有表?xiàng)攦翰杷貤斔狨ィ由靻卧饕斜項(xiàng)攦翰杷貤斔狨?，此外還含有少量表?xiàng)攦翰杷?。所有組成單元通過B型鍵連接而成，即楊梅葉原花色素為B型原花色素，未檢測(cè)到A型原花色素。楊梅葉原花色素平均聚合度為6.5。不可提取原花色素主要由表格兒茶素棓酸酯組成，還含有少量表?xiàng)攦翰杷?。楊梅葉原花色素的以上結(jié)構(gòu)組成特點(diǎn)顯示其在已有研究材料中具有獨(dú)特性。

4、
　　 研究了不同楊梅葉中原飛燕草素的組成(NP-HPLC-DAD法和酸催化降解法)，結(jié)果顯示所有楊梅葉原花色素都包含有EPAs和UEPAs，不同品種不同嫩度楊梅葉中的原飛燕草素的組成是不同的。對(duì)于荸薺種楊梅葉，無論是EGCG含量，還是原飛燕草素低聚體和高聚體含量，嫩葉中都高于次嫩葉和老葉，同樣地，UEPAs含量也是嫩葉高于其他葉。而對(duì)于東魁種楊梅葉情況則有所變化，除UEPAs含量是嫩葉中最高外，其他如EGCG、原飛燕草素低聚體

5、和高聚體的含量都是老葉中含量最高，另外兩種嫩度楊梅葉差別不大。在本文中，用NP-HPLC法分析原花色素組成，結(jié)果說明無論是荸薺種還是東魁種楊梅葉，其二聚體、三聚體和四聚體的含量總合大于聚合度大于4的EPAs。
　　 利用HPLC-DAD-ESIMS等方法分析了楊梅葉中原花色素低聚體及其他小分量多酚類物質(zhì)。鑒定出了四種黃烷-3-醇單體、三種原飛燕草素二聚體以及兩種原飛燕草素三聚體。鑒定出的其他酚類物質(zhì)有沒食子酸和六種黃酮糖苷，其中

6、楊梅黃酮糖苷為主要組成部分。此外還分析了荸薺和東魁兩種楊梅葉不同嫩度葉子中原飛燕草素等多酚類物質(zhì)的含量，結(jié)果顯示兩栽培品種嫩葉中總酚及原飛燕草素含量均最高。
　　 采用DPPH法和FRAP法測(cè)定了楊梅葉提取物抗氧化能力，分析了抗氧化成分，并采用響應(yīng)面分析法優(yōu)化了主要抗氧化成分原花色素的提取工藝。結(jié)果顯示楊梅嫩葉提取物抗氧化能力最強(qiáng)，如在DPPH體系中，其EC50值為4.15μg/mL(荸薺)、6.70μg/mL(東魁)，荸薺嫩葉

7、抗氧化能力強(qiáng)于葡萄籽原花色素；提取物抗氧化能力與原花色素含量呈線性正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.963(DPPH)、0.97(FRAP)；丙酮濃度、時(shí)間、料液比和溫度對(duì)原花色素提取量影響顯著，優(yōu)化后的工藝參數(shù)為丙酮濃度56.93％、時(shí)間31.98 min、料液比1:44.52、溫度50.00℃，在此條件下，預(yù)計(jì)原花色素提取量為121.2 mg/g，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果為117.3±5.1 mg/g，兩者差異不顯著。
　　 以荸薺種和東魁種嫩

8、葉為原料，研究熱水提取溫度和提取時(shí)間對(duì)提取物中總酚含量、原花色素含量、原花色素組成及提取物抗氧化活性的影響?？偡雍驮ㄉ睾恳话憔S提取溫度的升高和提取時(shí)間延長(zhǎng)而增加，但是超過一定溫度或時(shí)間時(shí)其含量略有下降。當(dāng)提取條件一定時(shí)，荸薺種總酚和原花色素含量低于東魁種。提取條件對(duì)不同聚合度原花色素含量也有影響，一般在較低溫度時(shí)(不超過75℃)低聚體部分的含量會(huì)隨提取溫度的升高而增加，而在較高溫度時(shí)含量減少。高聚體部分的含量隨提取溫度的升高和提

9、取時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。
　　 不同體外抗氧化試驗(yàn)體系(DPPH、ABTS、鐵氰化鉀、FRAP、螯合金屬離子)分析結(jié)果表明楊梅葉原飛燕草素具有很好的抗氧化活性，與抗壞血酸、葡萄籽原花青素和楊梅葉中的其他黃酮醇和酚酸比較，楊梅葉原花色素清除自由基的能力僅次于沒食子酸，顯著強(qiáng)于抗壞血酸、葡萄籽原花青素以及楊梅葉黃酮醇，還原能力強(qiáng)于葡萄籽原花青素，螯合金屬離子的能力較弱，與EDTA無可比性。將楊梅葉多酚及原花色素添加到油脂中去，它們都能夠

10、有效緩解油脂的氧化腐敗，楊梅葉原花色素緩解油脂氧化的能力顯著強(qiáng)于楊梅葉多酚及BHT。楊梅葉原花色素平均聚合度對(duì)其清除自由基能力影響顯著，其清除自由基能力隨平均聚合度的增加而增強(qiáng)。相對(duì)而言，平均聚合度對(duì)楊梅葉原花色素的還原力和螯合金屬的能力影響較小，隨著平均聚合度的增加，其還原力逐漸減小，金屬螯合能力逐漸增強(qiáng)。
　　 選用卵巢癌(OVCAR-3和CP-70)和前列腺癌(DU-145和PC-3)各兩種細(xì)胞株系分析了以原花色素為主要成

11、分的楊梅葉多酚(BLP)的抗癌活性。BLP能夠顯著抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖，而對(duì)前列腺癌細(xì)胞的增殖無抑制作用。BLP能夠抑制血管生成主要因子VEGF的表達(dá)，并能夠抑制調(diào)節(jié)VEGF表達(dá)的HIF-1α和p-AKT基因的表達(dá)，且對(duì)p-AKT的抑制作用強(qiáng)于對(duì)HIF-1α。BLP也能夠顯著抑制所選癌細(xì)胞中cMyc的表達(dá)。BLP對(duì)所選癌細(xì)胞中NF-κB表達(dá)的影響因細(xì)胞而異。BLP對(duì)所選癌細(xì)胞中保護(hù)性蛋白PTEN的表達(dá)有不同程度的抑制作用，綜合研究結(jié)果可