28091.人巨細(xì)胞病毒編碼的il10剪接體的克隆及表達(dá)

1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文人巨細(xì)胞病毒編碼的IL10剪接體的克隆及表達(dá)姓名：馮晶晶申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師：呂建新鄭曉群20100501溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文5、cmvlL10和LAcmvlL10抗血清的制備及鑒定將純化后的pMalc2xcmvlL10和pMal—c2xLAcmvlL10表達(dá)蛋白免疫家兔制備多克隆抗血清，并用Westernblot鑒定。結(jié)果：1、HCMV基因組DNA提取、cmvlL10基因的PCR擴(kuò)增、

2、克隆載體的構(gòu)建及序列測(cè)定應(yīng)用重疊延伸PCR擴(kuò)增出528bp的cmvlL10基因片段，重組子pMDl8TcmvlL10經(jīng)EcoRI／所甩dIII雙酶切鑒定及測(cè)序分析，結(jié)果顯示與HCMVADl69株cmvlL10序列一致。2、LAcmvlL10基因PCR擴(kuò)增、克隆載體的構(gòu)建及序列測(cè)定以pMDl8TcmvlL10質(zhì)粒為模板經(jīng)PCR擴(kuò)增出420bp的LAcmvlL10基因片段，重組予pMDl8TLA—cmvlL10經(jīng)EcDRI用鋤dIII雙酶切

3、鑒定及測(cè)序分析，結(jié)果顯示與HCMVADl69株L氣cmvlL10序列一致。3、原核重組TpMal—c2xcmvlL10和pMal—c2xL氣一cmvlL10表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定原核重組了pMalc2xcmvlL10和pMalc2xLAcmvlL。10分別經(jīng)EcoRI／HindIII雙酶切，電泳顯示約528bp，420bp處呈現(xiàn)明顯條帶，表明pMalc2xcmvlL10和pMal—c2xL氣一cmvlL10原核表達(dá)載體構(gòu)建成功。4、cmv

4、lL10和LA—cmvlL10重組菌的誘導(dǎo)表達(dá)及純化用IPTG誘導(dǎo)重組蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示05mmol／LIPTG在37℃誘導(dǎo)5h能有效地誘導(dǎo)重組蛋白的表達(dá)，利用Amyloseresin親和層析柱純化目的蛋白，SDSPAGE電泳分析目的蛋白大小為625kDa和583kDa，結(jié)果與預(yù)期吻合。5、cmvlL10和LAcmvlL10抗血清的制備及鑒定將純化后的pMalc2xcmvlL10和pMalc2x—LAcmvlL10重組蛋白免疫家兔，制備