22406.果蠅原多本酚氧化酶原核表達(dá)及其活性檢測(cè)研究_第1頁
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1、安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文果蠅原多本酚氧化酶原核表達(dá)及其活性檢測(cè)研究姓名：李旭全申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：劉朝良凌爾軍201106IIAbstractInsectprophenoloxidases(PPOs)areagroupofimptantinnateimmunityproteins.AlthoughtherehavebeennumerousstudiesdealingwiththePPOactivatio

2、ncadethedetailedbiochemicalbehavisofthePPOfamilyproteinsremaintobeclearlyestablished.ThisisdueprimarilytothedifficultyinobtainingadequateamountsofPPOproteinsfcomprehensiveacterization.InthisstudyweexpressedthreeDrosophil

3、amelanogasterPPOgenesinE.coliextensivelyevaluatedexpressionconditionsfobtainingsolubleproteins.ThroughthemanipulationofexpressionconditionsparticularlytheculturetemperatureofPPOtransfmedE.colicellswewereabletoobtainlarge

4、quantitiesofsolublerecombinantPPOproteins.Theresultsareasfollows:1.AllDrosophilamelanogasterPPO123genescouldbeexpressedinE.coli.At37almostallPPOproteinswereexpressedinconclusionbody℃，whichweremethanproteinsexpressedat16.

5、At16℃℃abouthalfofexpressedproteinswereinconclusionbodyalltheleftweresolubleprotein.PPO1PPO3expressedinE.colicellshavethesamemolecularweightasPPO1PPO3expressedinDrosophilamelanogasterS2cellaccdingtoWesternblotassay.Therea

6、sonmightbethatPPO1PPO3didn’tneedposttranslationalmodificationtoomuchmodification.HoweverthereasonwhyPPO2expressedinDrosophilamelanogasterS2cellwaslittlebiggerthanthatexpressedinE.colicellsmightbeduetoPPO2posttranslationa

7、lmodificationinS2cells.2.ActivityassayofPPOexpressedinE.colicellat16.Both℃transfmationalE.colicellstheircrudeproteincouldbeactivatedby30%ethanol0.02%CPC.PPO1hadthestrongestactivityamongthreePPOsPPO3hadstrongeractivitytha

8、nPPO2.30%ethanolcouldactivatemuchmePPOsthan0.02%CPCfPPO1PPO3but0.02%CPCwasbetterthan30%ethanolfPPO2.3.ExpressionamountsofPPO1.TheamoutsofPPO1expressedinE.colicellat16℃graduallyincreasedin12h.ItreachedatsubmitwhenPPO1wasi

9、nducedatthe12thh.4.Theinfluence30%ethanolCu2onthePPO1activity.WecoulddectecttheobviousenzymeactivitynomatterwhichoneCu230%ethanolwasaddedfirstly.HoweverweobservedthattheactivatedPPOshadhigheractivitiywhenCu2wasaddedbefe3

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