桑葉多酚氧化酶的提取、純化及其固定化研究.pdf

1、本文以桑葉為研究對象，研究桑葉多酚氧化酶的提取、分離純化以及對其固定化的研究，為揭示桑葉多酚氧化酶性質(zhì)，進一步開發(fā)利用桑葉多酚氧化酶奠定了初步基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容與結(jié)論如下：
　　 考察勻漿浸提法、超聲波輔助浸提法、丙酮輔助提取法三種方法對桑葉多酚氧化酶進行提取，確定丙酮輔助法作為最優(yōu)提取方法。根據(jù)正交試驗得出提取工藝條件為：提取時間為3小時，加入的料液比為1:20，提取pH為6.5。
　　 確定桑葉多酚氧化酶的純化工藝。

2、采用丙酮輔助法提取的桑葉多酚氧化酶，然后經(jīng)40%至80％硫酸銨沉淀，透析、濃縮過后的蛋白酶采用陰離子交換中壓層析系統(tǒng)進行純化分離，結(jié)果顯示3號峰為桑葉多酚氧化酶蛋白。再通過對蛋白酶的SDS-PEAG的線性關(guān)系式計算出其分子量為39.5Kd。
　　 確定桑葉多酚氧化酶的固定化工藝。試驗篩選出海藻酸鈉作為多酚氧化酶較優(yōu)的固定化載體，通過正交試驗得出最佳固定條件為：采用5%的海藻酸鈉，在1.5%的氯化鈣中固定2.5 h，然后用0.2%

3、的戊二醛交聯(lián)2.5 h，得出的最高酶活回收率為85.6%。進一步采用磁性四氧化三鐵復(fù)合海藻酸鈉對載體進行改造，優(yōu)化條件后最佳的工藝條件有較明顯的改變，酶活提升了7.84%。
　　 考察桑葉多酚氧化酶抑制劑對其的抑制作用，試驗得出最佳的抑制劑為抗壞血酸，當抗壞血酸濃度為1.5 g/L時，抑制率已達97%以上。對固定化酶的理化性質(zhì)進行分析得出桑葉多酚氧化酶經(jīng)固定化后，對溫度和pH的敏感程度有所降低，固定化酶最適溫度10℃，最適pH向