斑節(jié)對(duì)蝦酚氧化酶原基因的原核和真核表達(dá)研究.pdf_第1頁
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1、酚氧化酶原(proPO)是對(duì)蝦類體液免疫的特異性因子之一，在對(duì)蝦免疫過程中具有十分重要的作用，建立proPO的體外表達(dá)系統(tǒng)對(duì)于深入研究對(duì)蝦proPO參與免疫的過程及作用具重要意義。 本研究將斑節(jié)對(duì)蝦proPO基因克隆進(jìn)原核表達(dá)載體pET-28a(+)，在大腸桿菌中表達(dá)，SDS-PAGE和Western blot顯示在78.5 kDa附近有一條特異性條帶。采用低溫誘導(dǎo)表達(dá)后可直接檢測(cè)到酚氧化酶(PO)的活性，對(duì)表達(dá)后形成的包涵體進(jìn)

2、行變復(fù)性處理后也可檢測(cè)到PO的活性。 將proPO基因克隆進(jìn)昆蟲細(xì)胞表達(dá)載體pIZT/V5-His，轉(zhuǎn)染草地貪夜蛾(Sf 9)細(xì)胞，在熒光顯微鏡下可觀察到綠色熒光。經(jīng)過Zeocin<'TM>抗生素篩選后，轉(zhuǎn)基因細(xì)胞陽性率約在70％以上。用PCR可在細(xì)胞中檢測(cè)到相應(yīng)的GFP和proPO序列；SDS-PAGE檢測(cè)可在Sf9細(xì)胞中可以檢測(cè)到一條分子量約為67 kDa的特異性條帶，并且具有PO的酶活性，顯示proPO在Sf9細(xì)胞中得到成

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