12111.利用高代數ipsc制備嵌合體小鼠

1、CHIMERICMoUSEPRoDUCTIoNUSINGHIGHIPSCoFGENERATIoNADissertationSubmittedtomeGraduateSchoolofHenanUniversitviIlPanialFul伽mentoftlleRequ訛mentsfor也eDegreeofMasterofScienceBy耽砌即SuperVisor：ProfZhengHeXunandCaoGengshengDate：May，

2、2014摘要胚胎干細胞(ES)具有全能性，可以在特定的條件下誘導成為其他類型的細胞，ES細胞的特性讓它在模式動物建立及細胞治療方面有著廣闊的應用空間。但是ES細胞在人類的應用上存在著倫理道德等問題，因此ES的研究只能停留在動物層面上。誘導型多功能干細胞(iPSC)的出現再次讓科學家們對干細胞產生了濃厚的興趣。iPSC同ES細胞一樣都具有全能性，并且避開了ES細胞研究在倫理方面的局限，同時為細胞治療及轉基因動物方面的研究提供了有力的保障。

3、隨著研究的深入獲得iPSC的方法越來越多但是效率卻仍然很低，雖然我們一直在努力的優(yōu)化方法但是獲得iPSC依然不容易。最關鍵的是iPSC在應用上受到代數的影響，有研究認為高代數的iPSC因為無法保證其全能性，所以在應用上高代數的iPSC的潛力被忽略了。本實驗通過對IP219第40代這株細胞制備嵌合體小鼠證明高代數的iPSC依然具有良好的全能性。我們利用不同的方法獲得不同時期的胚胎，比較他們發(fā)育到囊胚的情況。利用體外授精的方式獲得原核期胚胎

4、，在體外進行培養(yǎng)，直至發(fā)育到囊胚期；其次通過正常交配取得2cell胚胎然后體外發(fā)育至囊胚；第三種方式是通過正常交配讓胚胎在體內發(fā)育到囊胚期后沖胚獲得，胚胎在體內完成發(fā)育過程。實驗結果表明：在使用相同數量小鼠的前提下，通過體外授精的方法發(fā)育到囊胚期的胚胎數量最多，平均552枚胚胎／4只小鼠；而通過正常交配的小鼠15d取胚胎平均為5225枚胚胎／4只小鼠；而通過正常交配取35d的胚胎則382枚胚胎／四只小鼠。正常交配15d獲得胚胎發(fā)育到囊胚

5、是77％士7％比體外授精的方式(73％士7％)稍高，但是體外授精的方式獲得的囊胚數比15d取胚比率要高，而且兩者跟沖胚獲得囊胚數相比差異顯著。我們采用手動和用陶瓷破膜儀(pizeo)兩種方法分別對囊胚進行注射，其中通過pizeo囊胚注射后胚腔塌陷后重新形成囊胚率738％要高于手動注射的591％。我們將注射后的囊胚進行移植，有一只假孕鼠產仔，共產仔8只，有一只是陽性鼠其余為陰性陽性率為125％。小鼠出生后生長正常沒有出現異常。本實驗中，進