12111.利用高代數(shù)ipsc制備嵌合體小鼠

1、CHIMERICMoUSEPRoDUCTIoNUSINGHIGHIPSCoFGENERATIoNADissertationSubmittedtomeGraduateSchoolofHenanUniversitviIlPanialFul伽mentoftlleRequ訛mentsfor也eDegreeofMasterofScienceBy耽砌即SuperVisor：ProfZhengHeXunandCaoGengshengDate：May，

2、2014摘要胚胎干細(xì)胞(ES)具有全能性，可以在特定的條件下誘導(dǎo)成為其他類型的細(xì)胞，ES細(xì)胞的特性讓它在模式動(dòng)物建立及細(xì)胞治療方面有著廣闊的應(yīng)用空間。但是ES細(xì)胞在人類的應(yīng)用上存在著倫理道德等問(wèn)題，因此ES的研究只能停留在動(dòng)物層面上。誘導(dǎo)型多功能干細(xì)胞(iPSC)的出現(xiàn)再次讓科學(xué)家們對(duì)干細(xì)胞產(chǎn)生了濃厚的興趣。iPSC同ES細(xì)胞一樣都具有全能性，并且避開了ES細(xì)胞研究在倫理方面的局限，同時(shí)為細(xì)胞治療及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物方面的研究提供了有力的保障。

3、隨著研究的深入獲得iPSC的方法越來(lái)越多但是效率卻仍然很低，雖然我們一直在努力的優(yōu)化方法但是獲得iPSC依然不容易。最關(guān)鍵的是iPSC在應(yīng)用上受到代數(shù)的影響，有研究認(rèn)為高代數(shù)的iPSC因?yàn)闊o(wú)法保證其全能性，所以在應(yīng)用上高代數(shù)的iPSC的潛力被忽略了。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)IP219第40代這株細(xì)胞制備嵌合體小鼠證明高代數(shù)的iPSC依然具有良好的全能性。我們利用不同的方法獲得不同時(shí)期的胚胎，比較他們發(fā)育到囊胚的情況。利用體外授精的方式獲得原核期胚胎

4、，在體外進(jìn)行培養(yǎng)，直至發(fā)育到囊胚期；其次通過(guò)正常交配取得2cell胚胎然后體外發(fā)育至囊胚；第三種方式是通過(guò)正常交配讓胚胎在體內(nèi)發(fā)育到囊胚期后沖胚獲得，胚胎在體內(nèi)完成發(fā)育過(guò)程。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在使用相同數(shù)量小鼠的前提下，通過(guò)體外授精的方法發(fā)育到囊胚期的胚胎數(shù)量最多，平均552枚胚胎／4只小鼠；而通過(guò)正常交配的小鼠15d取胚胎平均為5225枚胚胎／4只小鼠；而通過(guò)正常交配取35d的胚胎則382枚胚胎／四只小鼠。正常交配15d獲得胚胎發(fā)育到囊胚

5、是77％士7％比體外授精的方式(73％士7％)稍高，但是體外授精的方式獲得的囊胚數(shù)比15d取胚比率要高，而且兩者跟沖胚獲得囊胚數(shù)相比差異顯著。我們采用手動(dòng)和用陶瓷破膜儀(pizeo)兩種方法分別對(duì)囊胚進(jìn)行注射，其中通過(guò)pizeo囊胚注射后胚腔塌陷后重新形成囊胚率738％要高于手動(dòng)注射的591％。我們將注射后的囊胚進(jìn)行移植，有一只假孕鼠產(chǎn)仔，共產(chǎn)仔8只，有一只是陽(yáng)性鼠其余為陰性陽(yáng)性率為125％。小鼠出生后生長(zhǎng)正常沒(méi)有出現(xiàn)異常。本實(shí)驗(yàn)中，進(jìn)