紅江橙嵌合體及其衍生材料的遺傳背景分析.pdf

1、紅江橙(CitrussinensisOsbeckcv.'Hongjiangcheng')是廣東省著名的優(yōu)良甜橙品種，具有早結(jié)、豐產(chǎn)、質(zhì)優(yōu)等優(yōu)點(diǎn)，曾是閩南和湛江地區(qū)的主栽品種。由于紅江橙為嫁接嵌合體，其無性繁殖后代的果實(shí)性狀會(huì)出現(xiàn)分離(可分離為橙型紅肉果、紅黃肉嵌合果、橙型黃肉果、橘橙嵌合果、橘變果)。研究紅江橙嵌合體的遺傳背景和分離規(guī)律，是進(jìn)一步弄清其嵌合機(jī)理，為植物的人工嫁接產(chǎn)生嵌合體，進(jìn)而創(chuàng)造果樹嵌合體育種方法的重要基礎(chǔ)。

2、本研究通過體胚培養(yǎng)獲得紅江橙單細(xì)胞起源的植株，并利用SSR、ISSR、RAPD分子標(biāo)記對(duì)紅江橙3種分離類型及其實(shí)生植株、體胚植株的遺傳背景進(jìn)行了分析，探討了各類型紅江橙的遺傳組成及嵌合情況，獲得的主要研究結(jié)果有： 1.以不同類型的紅江橙(橙型紅肉果、橙型黃肉果、橘變果)果實(shí)的枝條上葉片基因組DNA為模板，從22對(duì)SSR引物中篩選出7對(duì)多態(tài)性引物，從5個(gè)ISSR引物中篩選出3個(gè)多態(tài)性引物，從9個(gè)RAPD引物中篩選出2個(gè)多態(tài)性引物，

3、用于實(shí)生后代及紅江橙體胚培養(yǎng)的幼苗的遺傳分析。 2.用多態(tài)性SSR引物對(duì)橙型紅肉果、橙型黃肉果、嵌合橘變果、橘變果的實(shí)生群體進(jìn)行遺傳分析，發(fā)現(xiàn)各類型實(shí)生后代的電泳圖譜相同，并且與橙型黃肉果的電泳圖譜一致。多態(tài)性RAPD引物和ISSR引物也能得到相同或相似的試驗(yàn)結(jié)果，表明各分離類型的實(shí)生后代均為橙。 3.分別以紅江橙成熟果實(shí)的飽滿種子、敗育胚、花后4～8周的幼嫩胚珠為外植體，進(jìn)行了體細(xì)胞植株誘導(dǎo)的研究。研究發(fā)現(xiàn)各種外植體均

4、能誘導(dǎo)出植株，但發(fā)育途徑不同?；ê?～8周的幼嫩胚珠誘導(dǎo)周期最短，大多直接發(fā)育成胚狀體，再轉(zhuǎn)化成植株。敗育胚則在接種后40天左右長(zhǎng)出大量胚性愈傷，培養(yǎng)2～3個(gè)月左右長(zhǎng)出大量胚狀體，繼而轉(zhuǎn)化成植株。飽滿種子誘導(dǎo)周期過長(zhǎng)，獲得的體細(xì)胞植株數(shù)量極少。幼嫩胚珠含合子胚可能性比敗育胚大。因此，從試驗(yàn)周期及試驗(yàn)?zāi)康目?，敗育胚為最佳外植體。 4.將體胚途徑產(chǎn)生的紅江橙幼苗基因組DNA與3種分離果的紅江橙枝條上的葉片基因組DNA、4種分離果的實(shí)

5、生苗后代的基因組DNA一起進(jìn)行SSR、ISSR、RAPD標(biāo)記分析，結(jié)果表明，除橘變果的體細(xì)胞植株外，其余體細(xì)胞植株的電泳圖譜均與黃肉果及實(shí)生苗的電泳圖譜相同或相近，主要擴(kuò)增條帶相同；橘變果體細(xì)胞植株的擴(kuò)增圖譜在特定位點(diǎn)缺少一條擴(kuò)增片段。結(jié)果表明，橘變果的體細(xì)胞植株已完全與橙型類型植株在遺傳上分離，而橙型果的體細(xì)胞植株保持著與橙相同的遺傳背景。 5.總結(jié)實(shí)生群體與組培誘導(dǎo)苗的遺傳鑒定結(jié)果，發(fā)現(xiàn)各類型紅江橙實(shí)生后代電泳圖譜相同；且與