非洲菊（Gerbera jamesonii Bolus）再生體系及遺傳轉化受體系統(tǒng)建立的研究.pdf

1、非洲菊是世界五大切花之一，深受人們的喜愛。隨著非洲菊組織培養(yǎng)技術的逐步發(fā)展和基因工程技術在各種花卉上的廣泛應用，非洲菊遺傳轉化育種作為一種重要的育種手段受到越來越多人的重視。良好的受體系統(tǒng)是進行遺傳轉化研究的基礎，本研究正是以此為著眼點進行了一系列的試驗，由最基本的非洲菊再生體系的建立直至遺傳轉化受體系統(tǒng)的最終建成。在整個研究過程中，首先探討和分析了非洲菊在誘導、分化和生根三個生長階段的各種影響因素；其次分析了影響非洲菊受體系統(tǒng)再生出芽

2、的各種可能因子，包括培養(yǎng)基的篩選、硝酸銀的使用、苗齡間的差異、對受體的不同處理以及抗生素的使用和篩選(卡那霉素、頭孢霉素、羧芐青霉素)。主要研究結果如下： 再生體系的建立：通過比較以葉片和花托為外植體的愈傷組織的誘導和分化，其結果表明花托是非洲菊組織培養(yǎng)較為適合的外植體類型。3個不同品種非洲菊的幼嫩葉片在A-F等各種培養(yǎng)基中培養(yǎng)，均能誘導出愈傷組織，但沒有芽的分化；4個不同品種非洲菊的幼小花托在所設各種培養(yǎng)基中均能誘導出愈傷組織

3、，但只有YY和213品種在6-BA5.0mg/L+NAA0.2mg/L上能夠誘導分化出芽，出芽頻率分別為50-60﹪和50﹪。YY和213的繼代增殖培養(yǎng)基為6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L。在生根方面，綜合比較根長和根數兩種參數的結果是213以R1(IAA為0.5mg/L)好；YY以R4(NAA0.2mg/L)為好。 受體系統(tǒng)的建立：以YY和213品種試管苗葉片為外植體建立的受體系統(tǒng)最適培養(yǎng)基激素組合為6-BA4.0

4、mg/L+NAA0.01mg/L，在此培養(yǎng)基上二者的分化頻率最大分別達到23.1﹪和20.7﹪；添加一定濃度的硝酸銀溶液后，213品種的分化頻率均有較大提高，但以0.5-2.0mg/L處理較為適宜。不同苗齡的213品種在該濃度范圍內，將外植體進行四種不同方式的處理(D、Z、S、B)，發(fā)現21天的試管苗以S法接入最好，分化頻率可以維持在75﹪，比對照提高了近2.4倍。以卡那霉素為抗性植株的選擇劑，其選擇壓力以25mg/L為宜，在此濃度下，

5、無論是S法還是Z法，受體出芽頻率比對照都有不同程度的下降，而且新長出的芽出現了白化癥狀。作為抑菌劑的頭孢霉素和羧芐青霉素，對受體芽再生的影響不同：在200-500mg/L的濃度范圍內，盡管頭孢霉素在較高濃度時(400-500mg/L)對213品種的愈傷組織發(fā)生有抑制作用，但在整個濃度范圍內對兩個品種均表現出抑制分化出芽的跡象。羧芐青霉素對兩個品種的愈傷組織發(fā)生似乎沒有影響，但在適宜的濃度下卻能促進芽的分化——YY在500mg/L時，分化