鹽地堿蓬再生體系及遺傳轉(zhuǎn)化體系的初步建立.pdf

1、山東師范大學碩士學位論文鹽地堿蓬再生體系及遺傳轉(zhuǎn)化體系的初步建立姓名：趙術(shù)珍申請學位級別：碩士專業(yè)：植物學指導教師：王寶山20060520山東師范大學碩士學位論文織的誘導被完全抑制，當達到50mgI。1時，95％的下胚軸褐化死亡。在愈傷組織誘導過程中，Ps(PiperalillinSodium，哌拉西林鈉)濃度為500mgL1時對愈傷組織誘導的影響不顯著。高濃度的Ps(600mgL。)對愈傷組織的誘導有明顯的抑制作用，綜合考慮，在鹽地堿

2、蓬農(nóng)桿菌介導的遺傳轉(zhuǎn)化中，誘導愈傷組織的過程宜選用Ps500mgL1來抑制農(nóng)桿菌的生長，Ran篩選的臨界濃度為30mgL。3以鹽地堿蓬下胚軸作為根癌農(nóng)桿菌(LBA4404)介導轉(zhuǎn)化的受體，通過對GUS基因穩(wěn)定表達率的分析，研究該轉(zhuǎn)化體系的最佳參數(shù)。結(jié)果表明預培養(yǎng)時間、共培養(yǎng)時間、農(nóng)桿菌濃度、感染時間和乙酰丁香酮(Acetosyring。ne，AS)的添加方式等對轉(zhuǎn)化效率都有一定的影響。最佳轉(zhuǎn)化參數(shù)是：切取10天苗齡的無菌苗下胚軸58fi

3、lm，預培養(yǎng)2d后于OD6000j添加100刪AS農(nóng)桿菌懸浮液中感染5J0min，吸去多余的菌液，將下胚軸轉(zhuǎn)移到添加100PMAS共培養(yǎng)基中共培養(yǎng)4天，然后轉(zhuǎn)移到脫菌培養(yǎng)基中進行抑菌培養(yǎng)，3天后將下胚軸轉(zhuǎn)到篩選培養(yǎng)基上連續(xù)篩選3～4代，每代12天，獲得抗性愈傷組織，轉(zhuǎn)化頻率為63％。4對轉(zhuǎn)基因抗性愈傷組織進行G瞧基因組織化學染色和PCR檢測，證實了外源基因己經(jīng)整合到鹽地堿蓬愈傷組織的基因組中，并得到穩(wěn)定表達。我們正在利用轉(zhuǎn)基因抗性愈傷組