藍(lán)眼菊再生和轉(zhuǎn)化體系的建立及優(yōu)化.pdf

1、藍(lán)眼菊(Osteospermum hybrida)，為菊科，藍(lán)眼菊屬植物，是一種新興的地被、盆栽花卉。它花量大、花色艷麗，株叢豐滿，具有很高的觀賞價(jià)值和廣闊的市場開發(fā)前景。但是由于它不耐夏季高溫，耐寒力中等，使其在我國城市綠化中的使用、推廣受到限制。針對該問題，本研究利用組織培養(yǎng)技術(shù)在前人的基礎(chǔ)上優(yōu)化藍(lán)眼菊的再生體系，用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法建立藍(lán)眼菊遺傳轉(zhuǎn)化體系，為藍(lán)眼菊新品種選育、改良工作創(chuàng)造條件。主要研究結(jié)果如下：
　　 在前人研究

2、的基礎(chǔ)上優(yōu)化了藍(lán)眼菊的再生體系，本論文用三種藍(lán)眼菊進(jìn)行對比實(shí)驗(yàn)，分別為‘花葉’、‘107’、‘23’，間接再生葉片誘導(dǎo)愈傷組織的最適培養(yǎng)基分別為‘花葉’MS+BA1.0 mg/L+MAA0.5/0.75 mg/L，分化率為98.06％；‘107’MS+BA1.0 mg/L+NAA0.5/0.75 mg/L，分化率為1000/0；‘23’MS+BA1.0 mg/L+IBA0.5/1.0 mg/L，分化率為92.39％；愈傷組織誘導(dǎo)不定芽最

3、適培養(yǎng)基‘花葉’、‘107’、‘23’均為MS+BA1.0 mg/L+NAA0.5/1.0 mg/L，其中分化率分別為47.62％、44.76％、40.29％；直接再生葉片直接誘導(dǎo)不定芽最適培養(yǎng)基‘花葉’MS+BAl.0 mg/L+IBA0.6 mg/L，最適外植體為幼葉，分化率為49.43％；‘107’為MS+BA1.0 mg/L+IBA0.6 mg/L，最適外植體為幼葉，分化率為48.53％；‘23’為MS+BA1.0 mg/L+N

4、AA0.5 mg/L，最適外植體為幼葉或葉盤，分化率為48.51％；當(dāng)繼代次數(shù)超過6代時(shí)，最適外植體為葉盤，誘導(dǎo)率最高達(dá)94.28％；不定芽的增殖培養(yǎng)，當(dāng)繼代次數(shù)6代內(nèi)時(shí)，‘花葉’、‘107’最適合的增值培養(yǎng)基為MS+BA1.0 mg/L+IBA0.5 mg/L，‘23’為MS+BA1.0 mg/L+NAA0.5 mg/L；當(dāng)繼代次數(shù)超過6次后，激素濃度則應(yīng)降低，否則玻璃化程度非常嚴(yán)重。生根培養(yǎng)基本培養(yǎng)基為1/2MS，‘107’最適生根

5、培養(yǎng)基1/2MS+NAA0.3 mg/L而‘花葉’、‘23’為1/2MS+NAA0.5 mg/L，研究還發(fā)現(xiàn)用MS培養(yǎng)基培養(yǎng)4w以后藍(lán)眼菊生根率可達(dá)到100％。
　　 初步藍(lán)眼菊轉(zhuǎn)化體系的建立，以‘花葉’為主要材料，用葉片與愈傷組織兩種材料，采用葉盤法，預(yù)培養(yǎng)、共培養(yǎng)培養(yǎng)基：葉片MS+BA1.0 mg/L+IBA0.8mg/L；愈傷組織為：MS+BA1.0 mg/L+NAA0.6 mg/L；篩選培養(yǎng)基葉片MS+BA1.0mg/L