香蕉與龍眼轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)建立及轉(zhuǎn)化PEAS基因初步研究.pdf

1、該研究分別以香蕉(Musa spp.)品種天寶蕉(AAA類型)試管苗莖尖的橫切薄片和龍眼(Dimocarpus longan Lour.)品種"紅核子"幼胚誘導(dǎo)并長(zhǎng)期繼代保持的胚性愈傷組織(Embryogenic calli,簡(jiǎn)稱EC)作為試驗(yàn)材料,建立了香蕉與龍眼基因轉(zhuǎn)化的受體系統(tǒng),并采用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行香蕉和龍眼轉(zhuǎn)化的初步研究.主要試驗(yàn)結(jié)果如下:1、建立了香蕉基因轉(zhuǎn)化的適宜受體系統(tǒng).采用橫切薄層培養(yǎng)方法建立了香蕉的高效再生系統(tǒng).

2、結(jié)果發(fā)現(xiàn):在30℃、黑暗培養(yǎng)15d,而后轉(zhuǎn)入24℃、光照培養(yǎng)5d的香蕉橫切薄層的出芽率較高,植株生長(zhǎng)較健壯,適宜用作轉(zhuǎn)基因的受體;羧芐青霉素對(duì)香蕉薄片的生長(zhǎng)沒(méi)有明顯的抑制作用,可以作為轉(zhuǎn)化的抑菌劑;香蕉對(duì)潮霉素比較敏感,能夠顯著抑制香蕉橫切薄層的出芽率,確定用40mg/L的潮霉素作為篩選的工作濃度.2、建立了龍眼基因轉(zhuǎn)化的適宜受體系統(tǒng).采用生長(zhǎng)量測(cè)定的方法確定了繼代培養(yǎng)10-15d的龍眼EC生長(zhǎng)速度最快,生活力最強(qiáng),適宜用作轉(zhuǎn)基因的受體

3、;同時(shí)采用生長(zhǎng)量測(cè)定結(jié)合定性觀察發(fā)現(xiàn)高濃度的潮霉素嚴(yán)重抑制龍眼EC的生長(zhǎng),確定50mg/L為有效的篩選濃度.3、進(jìn)行了對(duì)香蕉和龍眼基因轉(zhuǎn)化的初步研究.采用根癌農(nóng)桿菌(帶hpt基因)介導(dǎo)的方法進(jìn)行了目的基因PEAS導(dǎo)入香蕉橫切薄片和龍眼胚性愈傷組織的研究.采用附加潮霉素的篩選培養(yǎng)基對(duì)感染后的材料進(jìn)行篩選,共得到10個(gè)系列的香蕉抗性芽和5個(gè)龍眼抗性細(xì)胞系.由于時(shí)間的關(guān)系,對(duì)這些抗性芽和抗性EC的分子檢測(cè)只進(jìn)行了hpt抗性基因的PCR初步檢測(cè)