黃芪遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)的建立及aFGF轉(zhuǎn)化黃芪的研究.pdf

1、黃芪（Radix Astragali）為豆科（Leguminosae）黃芪屬（Astragalus）植物膜莢黃芪Astragalus membranaceus（Fisch．） Bge．及蒙古黃芪Astragalus membenanceus（Fisch．） Bge．Var．mongholicus（Bge．） Hsiao的干燥根。性溫，味甘，具有補(bǔ)氣固表，利尿托毒，斂瘡生肌，益氣補(bǔ)中之功效。人類酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子是成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子超

2、家族成員之一。aFGF具有廣泛的生物學(xué)作用且沒有種屬特異性。aFGF具有創(chuàng)傷愈合及組織修復(fù)的功能，黃芪有補(bǔ)氣固表、斂瘡生肌的功效，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)將aFGF基因?qū)朦S芪中，以期獲得具有二者共同累加作用的效果，為開發(fā)黃芪在斂瘡生肌方面的外用藥奠定基礎(chǔ)，從而為進(jìn)一步開發(fā)黃芪提供理論依據(jù)。 本試驗(yàn)分別以黃芪的子葉、下胚軸、葉片、莖段、子葉節(jié)為外植體研究了黃芪植株再生的器官發(fā)生途徑，建立起黃芪的高頻再生體系。試驗(yàn)結(jié)果表明子葉節(jié)為不定芽誘導(dǎo)

3、的最佳外植體、以保留全部子葉最佳，誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基組成為MS+BA2．0mg/L+IBA0．5mg/L．芽的誘導(dǎo)率可達(dá)到90．3％；以下胚軸為外植體在附加BA2．0 mg/L、IBA0．5mg/L的MS培養(yǎng)基上芽的誘導(dǎo)率達(dá)到26％，子葉、葉片、莖段為外植體無芽的分化；誘導(dǎo)生根最佳培養(yǎng)基為1/2MS+NAA5．0mg/L。 在建立了黃芪高頻再生體系的基礎(chǔ)上，采用根癌農(nóng)桿菌GV3101轉(zhuǎn)化黃芪子葉節(jié)，成功地將酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（a

4、FGF）導(dǎo)入黃芪。試驗(yàn)中研究了篩選壓、根癌農(nóng)桿菌的侵染濃度、侵染時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間等因素對(duì)黃芪遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，外植體在MS+2．0mg/L BA+0．5mg/L IBA培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)3d，農(nóng)桿菌濃度為OD600=0．3時(shí)侵染10 min后培養(yǎng)2d，轉(zhuǎn)移至含有MS+2．0mg/L BA+0．5mg/LIBA+500 mg/LCef+30mg/LKan的培養(yǎng)基誘導(dǎo)篩選培養(yǎng)，2個(gè)月后得到69個(gè)再生株系，經(jīng)過PCR初步檢測(cè)，證實(shí)