銀耳遺傳轉化系統(tǒng)的建立及三個品質基因的轉化.pdf

1、銀耳(Tremella fuciformis Berk.)又稱白木耳,是一種已大面積人工栽培、被人們普遍接受的滋補食品.該研究應用基因工程技術,遺傳轉化高賴氨酸蛋白基因、人乳鐵蛋白基因、人胰島素基因和蜜蜂抗菌肽基因,以期進一步提高銀耳的營養(yǎng)保健品質.文獻檢索結果,從1976年至今,未見銀耳遺傳轉化方面的研究報道.1建立了銀耳遺傳轉化系統(tǒng);研究出銀耳遺傳轉化的標記基因:研究了銀耳、大腸桿菌和農(nóng)桿菌對13種抗生素的敏感性,篩選出銀耳芽孢敏感

2、的兩種抗菌素--潮霉素、卡那霉素,確定潮霉素磷酸轉移酶基因(hpt)、新霉素磷酸轉移酶基因(nptII)作為銀耳遺傳轉化的篩選標記基因;測定了銀耳的β-半乳糖苷酶(lac Z)和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)的活性,確定GUS作為銀耳遺傳轉化的報告基因.通過誘變,獲得二個營養(yǎng)缺陷型菌株,其中一個是肌醇缺陷型,可應用于營養(yǎng)缺陷型標記的研究.建立銀耳原生質體制備與再生系統(tǒng).研究出2種用原生質體轉化的方法.研究出3種用芽孢直接轉化的方法.2遺傳轉

3、化三個品質基因;高賴氨酸蛋白基因(lys):賴氨酸是人體必需氨基酸,也是以大米為主食人群的第一限制性氨基酸,具有重要的營養(yǎng)價值.人胰島素基因(BCA):胰島素是糖尿病的特效藥,目前主要從動物胰腺中提取,基因工程重組人胰島素藥物已開發(fā)成功,并在臨床上應用,但生產(chǎn)成本較高.該研究合成了植物密碼子偏好的人胰島素基因(BCA),并從中克隆出人胰島素A鏈、B鏈基因,構建了銀耳表達載體,分別用REMI法、電擊法和PEG法把上述三個基因導入銀耳芽孢,

4、都得到大量的抗性菌株.蜜蜂抗菌肽基因(AP):抗菌肽具有廣譜抗菌活性、不會使病菌產(chǎn)生抗藥性,可提高農(nóng)產(chǎn)品的衛(wèi)生品質,是一類很有前景的肽類抗生素,已引起科學家們的重視.該研究合成了蜜蜂抗菌肽基因,應用LiAc法和PEG法把該基因導入銀耳芽孢,獲得大量抗性菌株,GUS活性檢測了19個抗性菌株,其中只有1個陰性,其它都為陽性.PCR檢測(包括目的基因、GUS基因和Tnos終止子序列)10個抗性菌株,均為陽性.測定了4個菌株對金黃色葡萄球菌的抑