側(cè)孢短芽孢桿菌A60激發(fā)子PeBL1鑒定和基因功能的研究.pdf

1、在全球倡導(dǎo)無公害無污染的綠色有機(jī)農(nóng)業(yè)形勢(shì)下，應(yīng)用生防菌防治植物病害越來越受到人們的關(guān)注。側(cè)孢短芽孢桿菌（Brevibacillus laterosporus）是一類廣泛應(yīng)用的生防細(xì)菌，除了具有殺菌抑菌功能外，還可以誘導(dǎo)植物產(chǎn)生系統(tǒng)抗性，從而能抵御多種病害的侵染，但其誘導(dǎo)植物抗性的作用機(jī)制研究報(bào)道較少。本文從側(cè)孢短芽孢桿菌A60菌株發(fā)酵液中分離純化出一種蛋白激發(fā)子PeBL1。該激發(fā)子能誘導(dǎo)煙草的防御反應(yīng)和系統(tǒng)抗性;克隆獲得了PeBL1基因

2、，并利用大腸桿菌(E.coli)表達(dá)系統(tǒng)成功獲得有生物學(xué)活性的重組蛋白;利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)技術(shù)研究了PeBL1誘導(dǎo)煙草防御相關(guān)基因的表達(dá)，初步分析了該激發(fā)子誘導(dǎo)煙草產(chǎn)生系統(tǒng)抗性的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。本研究對(duì)側(cè)孢短芽孢桿菌A60菌株在生物防治領(lǐng)域的應(yīng)用具有重要理論指導(dǎo)意義。具體結(jié)果如下:
　　1.利用硫酸銨沉淀、陽離子交換層析、高效液相色譜等技術(shù)從側(cè)孢短芽孢桿菌A60菌株發(fā)酵液中分離純化出一種蛋白激發(fā)子PeBL1（P

3、rotein elicitor from Brevibacillus laterosporus1）。PeBL1能夠引起煙草葉片典型的過敏反應(yīng)。PeBL1是非糖蛋白，在高溫以及過酸過堿的條件下均失去活性。
　　2.根據(jù)ESI-QTOF串聯(lián)質(zhì)譜結(jié)果，獲得了一個(gè)匹配度最高的來自側(cè)孢短芽孢桿菌的假設(shè)蛋白，功能未知，含有116個(gè)氨基酸，理論分子量為12833Da，確定該假設(shè)蛋白就是激發(fā)子PeBL1。并克隆得到了PeBL1基因(351bp)。

4、成功構(gòu)建了PeBL1-pET30原核表達(dá)載體，獲得了可溶性表達(dá)的、有生物活性的重組蛋白。
　　3.用PeBL1處理煙草后，會(huì)發(fā)生活性氧爆發(fā)，胞外堿化，酚類物質(zhì)和木質(zhì)素的積累等防御反應(yīng)，并提高了煙草對(duì)TMV-GFP和Pseudomonas syringae pv.tabaci的系統(tǒng)抗性。對(duì)TMV-GFP病斑數(shù)量和大小抑制率最大分別達(dá)到42.91％和43.23％。對(duì)Pseudomonas syringae pv.tabaci的侵染抑制