側(cè)孢短芽孢桿菌溶藻活性物質(zhì)特性及其對蝦池顫藻溶藻的研究.pdf

1、顫藻（Oscillatoria），作為對蝦養(yǎng)殖環(huán)境中的一種常見有害藍(lán)藻，能夠嚴(yán)重危及對蝦的生長、神經(jīng)和抗病力等各個方面。本論文研究了側(cè)孢短芽孢桿菌（Brevibacillus laterosporus）無菌濾液中溶藻活性物質(zhì)的部分理化特性，探究了不同濃度的無菌濾液對蝦池顫藻生長（藻體干重、葉綠素a質(zhì)量濃度）及生理生化指標(biāo)（藻藍(lán)蛋白PC、別藻藍(lán)蛋白APC、藻紅蛋白PE、丙二醛MDA、超氧化物歧化酶SOD、過氧化物酶POD、過氧化氫酶 CA

2、T）的影響，以及在不同菌、藻生長時期下無菌濾液對顫藻的溶藻效果（藻體干重、葉綠素a質(zhì)量濃度、藻藍(lán)蛋白PC、別藻藍(lán)蛋白APC和藻紅蛋白PE），以期為溶藻活性物質(zhì)的開發(fā)和實際應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)，為抑制有害藻類的繁殖、改善養(yǎng)殖水質(zhì)環(huán)境、減少對蝦病害的發(fā)生提供參考依據(jù)。主要的研究結(jié)果如下：
　　1.無菌濾液分別經(jīng)不同溫度、pH、蛋白酶和紫外照射時間處理后，均仍具有極為顯著的溶藻能力（p<0.01），同時，將其分別貯存于4℃和28℃環(huán)境中28

3、d，仍保持著極高的溶藻活性，充分表明菌株合成并釋放的溶藻活性物質(zhì)具有極強的穩(wěn)定性，具有較好的耐酸、耐堿、耐高溫、抗酶解、抗紫外輻射及在自然環(huán)境中長久存在的特性。加熱與未加熱的無菌濾液的茚三酮及考馬斯亮藍(lán)顯色反應(yīng)均為陽性，紫外光譜的最大吸收峰均在290~300nm之間。以上結(jié)果顯示，溶藻活性物質(zhì)屬于含有α-氨基和環(huán)狀結(jié)構(gòu)的單一或混合肽類物質(zhì)。
　　2.無菌濾液的濃度大小對顫藻的影響效果極為不同，低濃度的無菌濾液（投加量≤4％）明顯促

4、進顫藻的生長（p<0.01），當(dāng)無菌濾液高至一定濃度后（投加量≥8%）則對顫藻表現(xiàn)出極為顯著的抑制和溶解作用（p<0.01）。因此，底物濃度是溶藻作用能否產(chǎn)生的一個關(guān)鍵因素。在投加量分別為8mL和10mL的實驗組中，7d后顫藻的藻體干重比對照組分別減少了26.02%、45.30%，葉綠素a含量分別減少了46.88%、63.73%；整個溶藻過程中，藻藍(lán)蛋白（PC）、別藻藍(lán)蛋白（APC）、藻紅蛋白（PE）和丙二醛（MDA）的含量均始終高于對

5、照組呈現(xiàn)先升高后降低的變化趨勢，超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）和過氧化氫酶（CAT）活力雖仍呈現(xiàn)初期增高、后期降低的變化趨勢，但最終酶活力均低于對照組。初步顯示，溶藻活性物質(zhì)對顫藻的作用機理為：一定濃度的溶藻活性物質(zhì)作用于顫藻細(xì)胞，引發(fā)細(xì)胞的膜脂過氧化作用，造成生物膜脂化水平升高，膜系統(tǒng)由于生物膜的選擇透過性增加而遭到迫害；并通過破壞光合作用系統(tǒng)，影響光能的傳遞和分配，改變各色素含量的相對比例，致使光合效率下降；同時，損

6、傷抗氧化酶系統(tǒng)，毒害并抑制各種抗氧化酶的活性；最終導(dǎo)致藻體的正常生理代謝功能喪失，藻細(xì)胞破裂、死亡。
　　3.溶藻細(xì)菌不同生長時期的無菌濾液對顫藻的藻體干重、葉綠素 a含量以及藻藍(lán)蛋白PC、別藻藍(lán)蛋白APC、藻紅蛋白PE含量的影響極為顯著（p<0.01）。其中，在添加穩(wěn)定期和衰亡期細(xì)菌無菌濾液的實驗組中，7d后顫藻的藻體干重分別減少了51.77%、47.04%，葉綠素a含量分別降低了67.60%、59.13%；整個溶藻過程中，PC

7、、APC和PE的含量均始終高于對照組，呈現(xiàn)出劇烈的先升高后降低的變化趨勢。結(jié)果表明，穩(wěn)定期和衰亡期的無菌濾液對顫藻的抑制和溶解作用最強。
　　4.溶藻細(xì)菌的無菌濾液對不同生長時期顫藻的藻體干重、葉綠素 a含量以及藻藍(lán)蛋白PC、別藻藍(lán)蛋白APC、藻紅蛋白PE含量的影響極為顯著（p<0.01）。其中，在延滯期顫藻的實驗組中，7d后顫藻的藻體干重減少了63.90%，葉綠素a含量下降了69.72%；整個溶藻過程中，PC、APC和PE的含量