一株嗜鹽桿菌的溶藻特性及其溶藻活性物質的分離純化.pdf

1、赤潮是全球性的海洋生態(tài)災害問題之一，而其防治研究一直廣受關注。海洋溶藻細菌對赤潮藻類有高效的抑制作用，對環(huán)境負面影響較小，已成為赤潮防治研究的熱點之一，尤其是溶藻活性物質的發(fā)現，為赤潮治理提供了新的方法和思路，也是目前研究的難點和要突破的重點。
　　對中肋骨條藻（Skeletonema costatum）具有間接溶藻作用的嗜鹽桿菌溶藻菌株（Halobacillus sp. HSQAY1，GenBank登錄號為JX308828）由本

2、實驗室從深圳大鵬灣赤潮爆發(fā)海域分離并保藏。本文研究了該嗜鹽桿菌的生長特征，胞外溶藻物質的理化特性，并對溶藻物質進行了初步的分離純化。主要結果如下：
　?。?）采用平板菌落法測定了溶藻細菌HSQAY1的生長曲線，結果顯示0-8 h為遲緩期，8-40 h為對數期，40-72 h進入穩(wěn)定期，72 h后進入衰亡期；遲緩期期間細菌無菌濾液的溶藻作用不顯著，而進入對數期后其溶藻作用顯著增強，此后溶藻率基本穩(wěn)定在80.4％～93.4%之間。

3、r>　?。?）細菌分別用pH為5.5，6.5，7.5，8.5和9.5的培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h后，其無菌濾液的溶藻率分別為20.62%，46.10%，61.14%，62.99%，74.41%，表明弱酸性條件不利于細菌生長或合成分泌溶藻物質，而堿性環(huán)境更有利于細菌的生長或溶藻物質的合成分泌；用鹽度分別為20，25，30，35，40培養(yǎng)基培養(yǎng)細菌48h，其無菌濾液的溶藻率分別為53.03%，88.13%，87.94%，41.91%和17.25%，

4、表明鹽度為25~30時最有利于細菌生長或合成分泌溶藻物質，而鹽度過高（鹽度為40）則會抑制其生長或溶藻物質的合成。
　　（3）菌株HSQAY1產生的溶藻活性物質在強酸性條件下（pH=3）喪失活性，而pH5~11時其溶藻率在83.4%～98.4%之間；溫度在30~110℃時，其溶藻率在71.7%～94.5%之間，表現出一定的酸堿穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性；此外，該溶藻物質不受反復凍融（-20℃）的影響。說明溶藻活性物質不耐強酸，但有較好的耐堿

5、性、熱穩(wěn)定性和不受反復凍融影響，有較強的環(huán)境穩(wěn)定性。
　?。?）無菌濾液經乙醇沉淀分離獲得的沉淀相具有溶藻活性，溶藻率高達到65.6%，而浸提相無溶藻活性；硫酸銨飽和度為60%～80%時可析出具有顯著溶藻活性的粗蛋白沉淀，超濾法獲得溶藻活性組分的分子量大于10 kDa，表明該溶藻活性物質可能是一種分子量大于10 kDa的蛋白類物質。
　?。?）硫酸銨沉淀的粗蛋白SDS-PAGE電泳結果顯示在15~40 kDa間有3條明顯的特