肌張力障礙致病基因的突變篩查.pdf

1、肌張力障礙(dystonia)是一組以持續(xù)性的肌肉收縮、重復性扭轉(zhuǎn)運動和異常姿勢為特征的神經(jīng)性肌肉運動障礙。它分為兩種類型。繼發(fā)性肌張力障礙，可以由腦部腫瘤、感染或者外界環(huán)境的特殊刺激等造成。遺傳缺陷在某些病人中被認為是導致原發(fā)性肌張力障礙的原因。通常認為，患者的大腦發(fā)生了功能上或者微結(jié)構(gòu)的變化。 該疾病的臨床表現(xiàn)具有一定的異質(zhì)性?；蚧A(chǔ)也有一定的遺傳異質(zhì)性(genetic heterogeneity)。至今，遺傳性肌張力障礙

2、，已克隆基因有7個，還有6個已定位的染色體節(jié)段，但基因尚未被克隆。這7個基因編碼的蛋白產(chǎn)物均以不同機制影響該疾病的發(fā)病過程。TOR1A基因(GenBank ID：NM_000113)，編碼產(chǎn)物為扭轉(zhuǎn)蛋白A，此基因突變會造成早發(fā)性扭轉(zhuǎn)型肌張力障礙(DYTI)的運動性疾?。籘AFI(TATA-結(jié)合蛋白相關(guān)因子1，GenBankID：NM_004606)基因，編碼最大的轉(zhuǎn)錄因子Ⅱ D(TF Ⅱ D)復合物組件，該基因的異常改變可以導致X-連鎖

3、隱性遺傳的肌張力障礙-帕金森病(XDP，DYT3)；GCH1基因，編碼GTP環(huán)水解酶I，此基因突變會導致罕見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病稱多巴反應(yīng)性肌張力障礙(DYT5)；MR-1基因(GenBank ID：NM_015488.4)，編碼肌纖維生成調(diào)節(jié)因子1，突變會導致陣發(fā)性非運動源性運動障礙(PNKD，DYT8)；SGCE基因(GenBank ID：NM_003919)，編碼產(chǎn)物為ε肌膠質(zhì)，致病突變會引起遺傳性肌陣攣．肌張力障礙(MD，DYT11)

4、；DRD2(多巴胺D2受體，GenBank ID：NM_000795)基因的突變也可以導致MD。ATP1A3基因(GenBank ID：NM_152296)，為Na+／K+-ATP酶α 3亞基編碼，它的錯義突變會引起早發(fā)型肌張力障礙-帕金森病(RDP，DYT12)。本實驗的目的旨在所收集的患者中研究上述基因的突變譜。本次實驗收集了4個小家庭和6個散發(fā)病例，疾病經(jīng)由臨床神經(jīng)科教授診斷，患者共16人。診斷標準主要是根據(jù)患者特有的頸部、軀干、

5、四肢的不自主痙攣和扭動，而無明確病因，如再有陽性家族史則可確診。病人知情同意后，采集病人和家庭中部分正常人外周靜脈血，基因組DNA提取；設(shè)計引物，覆蓋了基因的全部編碼區(qū)和外顯子-內(nèi)含子交界區(qū)；利用PCR技術(shù)擴增出上述區(qū)域；將PCR產(chǎn)物進行序列測定，在ABI 3730XL毛細電泳測序儀上讀出序列；利用CLUSTALX軟件將得到的序列與數(shù)據(jù)庫比較，同時將病人與家系中的非患者序列也進行比較。 經(jīng)過序列分析后，本實驗在TORIA基因的編

6、碼區(qū)共發(fā)現(xiàn)2個SNPs，其中1個SNP是錯義突變(rsl801968)，1個SNP是同義突變(rs2296793)。還有非編碼區(qū)的5個SNPs和2個單堿基G缺失，其中2個SNPs是新發(fā)現(xiàn)的(g．131617436G>A，g．131620813C>G)；由于該錯義突變也在非患者中鑒定到，所以該點的致病作用還不能確定。在GCHI基因3’非翻譯區(qū)共發(fā)現(xiàn)3個SNPs(g．54440930T>C，g．54440981C>T，rs841)，其中有2

7、個SNPs是新發(fā)現(xiàn)的。ATPlA3基因的編碼區(qū)發(fā)現(xiàn)1個新SNP(c．222C>T)，為同義突變；1個已知SNP(rs61173666)，也為同義突變；在非編碼區(qū)發(fā)現(xiàn)2個新的SNPs(g．47168229C>A，g．47168932A>G)。SGCE基因的非編碼區(qū)共發(fā)現(xiàn)2個SNPs(rs2272091，g．94104852T>G)，和一個純合性改變(rs61604798)，分別位于第3和第5內(nèi)含子中。DRD2基因中有個3個編碼區(qū)SNPs，