KPNA2過表達(dá)促進(jìn)rtA181T突變型乙肝病毒表面蛋白入核上調(diào)肝細(xì)胞c-Myc表達(dá).pdf

1、分類號(hào)：密級(jí)：UDC：學(xué)號(hào)：406522512605南昌大學(xué)碩士研究生南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文學(xué)位論文KPNA2過表達(dá)促進(jìn)過表達(dá)促進(jìn)rtA181T突變型乙肝病毒表面蛋突變型乙肝病毒表面蛋白入核上調(diào)肝細(xì)胞白入核上調(diào)肝細(xì)胞cMyc表達(dá)表達(dá)karyopherinα2overexpressedfacilitatesnuclearimptofdsurfaceproteinofHBVtoupregulatetheexpressionofcMyc熊

2、弘熊弘培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：張芳林副教授申請(qǐng)學(xué)位的學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱：藥理學(xué)論文答辯日期：2015年5月答辯委員會(huì)主席：謝勇評(píng)閱人：方鋁劉建新2015年5月摘要II摘要摘要目的：目的：構(gòu)建pKPNA2、pHBsAg、pHBsAgt三種質(zhì)粒，通過分組分別轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞、LO2細(xì)胞和293T細(xì)胞，探討KPNA2過表達(dá)在rtA181T型乙肝病毒表面蛋白上調(diào)cMyc表達(dá)過程中的作用。方法：方法：（1）

3、從GenBank中分別查找KPNA2、HBsAg的mRNA序列，利用primerpremier5.0軟件設(shè)計(jì)引物，應(yīng)用RTPCR方法獲得目的片段，雙酶切后與真核表達(dá)質(zhì)粒連接，從而構(gòu)建成pKPNA2、pHBsAg質(zhì)粒；（2）以構(gòu)建好的pHBsAg質(zhì)粒為模板，采用定點(diǎn)突變方法使其產(chǎn)生rtA181T突變以構(gòu)建pHBsAgt質(zhì)粒；（3）分組與轉(zhuǎn)染：①pHBsAg組、②pHBsAgt組、③pKPNA2組、④pKPNA2pHBsAg組、⑤pKPNA

4、2pHBsAgt組、⑥空載質(zhì)粒組，共6組；分別轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞、LO2細(xì)胞、293T細(xì)胞；（4）檢測(cè)：轉(zhuǎn)染48h后，采用Lig綠色熒光染料染色技術(shù)檢測(cè)KPNA2的細(xì)胞內(nèi)分布；收集細(xì)胞總蛋白，westernblot檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)并進(jìn)行灰度值分析；收集細(xì)胞總RNA，RTFQPCR檢測(cè)目的基因mRNA的表達(dá)。結(jié)果：結(jié)果：（1）質(zhì)粒雙酶切后用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，條帶位置大小與目的片段一致；（2）pKPNA2、pHBsAg和pHBsAg

5、t重組質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果符合實(shí)驗(yàn)要求；（3）三種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后，westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示，pKPNA2pHBsAgt組和pHBsAgt組的cMyc表達(dá)都顯著高于其他4組（P＜0.05），說明rtA181T型乙肝病毒表面蛋白能夠上調(diào)cMyc表達(dá)；但pKPNA2pHBsAgt組與pHBsAgt組比較無明顯差異（P＞0.05）。（4）三種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染LO2細(xì)胞后，westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示，pKPNA2pHBsAgt組和pH