野生型與C544T突變型人角蛋白9表達(dá)載體構(gòu)建.pdf_第1頁(yè)
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1、該研究所在山東省遺傳病調(diào)查中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)掌跖角化合并指節(jié)墊大家系,盧勇等采用候選基因分析方法證明該家系致病基因與KRT9基因所在區(qū)域多態(tài)位點(diǎn)連鎖,對(duì)該家系患者KRT9A基因突變分析發(fā)現(xiàn)患者KRT9基因第544位核苷酸的堿基C被T替代(C544T),導(dǎo)致其所編碼的角蛋白9的第160位氨基酸由亮氨酸突變?yōu)楸奖彼?L160F).此位置位于角蛋白9桿狀區(qū)的1A區(qū),而此區(qū)域是目前發(fā)現(xiàn)的導(dǎo)致EPPK突變的高發(fā)區(qū)域.為進(jìn)一步分析角蛋白9基因C544T

2、突變對(duì)角蛋白功能的影響,該研究首先采用PCR擴(kuò)增方法從患者基因組DNA中擴(kuò)增得到了含有突變位點(diǎn)的KRT9基因第一外顯子片段,并將其克隆到TA載體中;同時(shí)擴(kuò)增得到包含角蛋白9全部編碼序列的野生型KRT9基因片段即KRT9基因cDNA45~1932,并將其依次克隆到TA載體和過(guò)渡載體中;在此基礎(chǔ)上,再用含突變位點(diǎn)的片段置換野生型克隆中的相應(yīng)片段,得到含C554T點(diǎn)突變的角蛋白9編碼序列.為便于檢測(cè),該研究將野生型和C554T突變型KRT9基

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